【摘 要】
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目的 探讨Rab32（Ras-related proteins in brain 32）在树突状细胞（dendritic cells, DCs）内卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染中的作用。方法 通过小鼠DC2.4细胞建立BCG感染模型，通过RNA-Seq技术检测BCG感染后DCs内Rab基因的表达变化；通过生信分析筛选BCG感染后差异表达的Rab蛋白；west
【基金项目】
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贵州省科技计划项目（黔科合基础[2018]1191）； 遵义医科大学博士科研启动基金（No.F-810）；
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目的 探讨Rab32（Ras-related proteins in brain 32）在树突状细胞（dendritic cells, DCs）内卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染中的作用。方法 通过小鼠DC2.4细胞建立BCG感染模型，通过RNA-Seq技术检测BCG感染后DCs内Rab基因的表达变化；通过生信分析筛选BCG感染后差异表达的Rab蛋白；western blot法检测BCG感染后DC2.4细胞内Rab32蛋白的表达情况；采用慢病毒转染技术制备EYFP-Rab32过表达DC2.4细胞（EYFP-Rab32 DC2.4细胞）,采用western blot法和流式细胞术进行转染效率验证；通过细胞载菌量实验检测EYFP-Rab32 DC2.4细胞内BCG的增殖；采用western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase, PI3K）/蛋白激酶（protein kinase B,AKT）通路蛋白的变化。结果 DC2.4细胞中存在55种Rab蛋白，BCG感染后10种Rab蛋白的表达水平发生明显变化；Rab32蛋白随着感染时间的增加而增加，感染0 h和48 h时Rab32表达显著增加（P＜0.05）。BCG感染EYFP-Rab32 DC2.4细胞48 h时BCG载菌量为（60.16±4.69）×10~4 CFU/孔，较DC2.4细胞明显增多[（21.09±1.56）×10~4 CFU/孔]（P＜0.01）;这可能与Rab32过表达导致BCG感染DC2.4细胞后p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT增多（P＜0.05）,即Rab32激活PI3K/AKT通路相关。结论 Rab32可能通过调控PI3K/AKT通路促进DCs内BCG增殖。
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