【摘 要】
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根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
【基金项目】
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科技部农业科技成果转化基金项目(2009GB2C100129);江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(09)118]
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根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P36蛋白于发酵上清液中,通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了分泌性表达,而且具有良好的反应原性,这为猪肺炎支原体免疫检测试
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