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目的 构建定向敲除牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白FimA基因的质粒pPHU281_A_Spec_B,用于后续构建菌毛蛋白FimA缺陷型Pg,为研究FimA的功能奠定分子基础.方法 厌氧培养PgATCC33277,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增PgFimA基因一定长度的上游A片段及下游B片段,并在扩增片段两端添加合适的酶切位点；利用定向克隆技术将A和B 基因插入到载体自杀质粒pPHU281中,并添加大观霉素抗性基因片段,重组的pPHU281 _A_Spec_B 在大肠杆菌DH-5α内扩增后酶切电泳鉴定并进行DNA测序.结果 通过对重组质粒pPHU281_A_Spec_B进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明重组质粒pPHU281_A_Spec_B构建成功.结论 成功构建了质粒pPHU281_A_Spec_B,有利于菌毛蛋白FimA缺陷型Pg的构建,为深入研究FimA的作用机制奠定了基础。