论文部分内容阅读
目的 研究一氧化氮供体(JS-K)与阿司匹林联合用药协同诱导人肝细胞癌(肝癌)HepG2和SMMC7721细胞凋亡的作用.方法 人肝癌HepG2和SMMC7721细胞分别设立细胞对照组(只加等量二甲亚砜,终浓度<0.01％)、JS-K 5μmol·L-1组、阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组、JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10,20 mmol·L-1组.MTT法检测细胞增殖抑制率并计算联合用药指数(CI);倒置显微镜下观察细胞形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率.2种细胞分为6组:细胞对照、JS-K 5μmol·L-1、阿司匹林20 mmo·L-1、Z-VAD-FMK 50μmol·L-1、JS-K+阿司匹林和JS-K+阿司匹林+Z-VAD-FMK组,给药后处理24 h.DAPI染色观察细胞核形态变化;Western印迹法检测活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达.结果 与JS-K 5μmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组HepG2和SMMC7721细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05,P<0.01),且具有一定的协同作用(CI<1).JS-K 5μmol·L-1组、阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组、JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组细胞扁圆,生长迟缓,形态不规则,脱落并悬浮于培养液中.与JS-K 5μmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10,20 mmol·L-1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01).DAPI染色结果显示,与JS-K 5μmol·L-1单药组或阿司匹林20 mmol·L-1单药组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡样特征更加明显,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01).与JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1+Z-VAD-FMK 50μmol·L-1组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡特征减少,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 JS-K与阿司匹林联用具有协同抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用机制与激活胱天蛋白酶诱导的凋亡级联反应有关.