【摘 要】
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用TRIZOL试剂盒分别提取日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第一链cDNA,完成第二链cDNA合成后,凝胶电泳回收500bp以上的片段并过柱
【机 构】
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中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海,200232中国科学院上海生物化学研究所,上海,200231;
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用TRIZOL试剂盒分别提取日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第一链cDNA,完成第二链cDNA合成后,凝胶电泳回收500bp以上的片段并过柱纯化后,与载体λZipLox连接.体外包装后分别得到雌、雄成虫cDNA噬菌体表达文库.经测定雌、雄文库容量分别为3.74×106、3.28×106,重组比率均在96%以上,插入片段长度多在1kb左右.通过PCR技术,我们从文库中钓取到EGP、23kD膜蛋白、Actin和GCP的cDNA,其中GCP基因为低丰度表达基因.各项指标表明,我们成功构建了高质量的cDNA文库,可作为研究雌雄成虫基因差异及筛选保护性抗原基因的重要资源.
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