【摘 要】
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根据美国马传染性贫血病病毒（ＥＩＡＶ）Ｗｙｏｍｉｎｇ株基因序列，设计扩增ＥＩＡＶ ｇａｇ和ｐ２６基因的引物，用ＰＣＲ法能忠实的分别扩增出全长ｇａｇ的ｐ２６基因。经用杆状病毒表达和地的获ｇａｇ和ｐ２６基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Ｇａｇ和ｐ２６蛋白
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所!哈尔滨,黑龙江省卫生防疫站病毒所
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根据美国马传染性贫血病病毒（ＥＩＡＶ）Ｗｙｏｍｉｎｇ株基因序列，设计扩增ＥＩＡＶ ｇａｇ和ｐ２６基因的引物，用ＰＣＲ法能忠实的分别扩增出全长ｇａｇ的ｐ２６基因。经用杆状病毒表达和地的获ｇａｇ和ｐ２６基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Ｇａｇ和ｐ２６蛋白的重组杆状病毒。含有ｇａｇ和ｐ２６基因的重组杆状病毒感染昆虫Ｓｆ２１细胞，经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化，每升培养物能获得２ｍｇ Ｇａｇ或１２ｍ
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将ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８－ＯＲＦ７切下后，插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ，ＰＬ启动子下游，得到重组表达质粒，ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７，转化了ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物，结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效
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