【摘 要】
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将CRISPR/Cas12b与环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法相结合，应用于乳粉中克罗诺杆菌属的检测。通过基因组比较寻找克罗诺杆菌菌株基因内部的候选保守序列，针对克罗诺杆菌属特异性关键基因序列设计LAMP引物和向导RNA靶向序列，对其进行条件优化、特异性检测，并用人工污染样品对体系的灵敏度、重复性进行验证。结果表明该方
【基金项目】
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国家市场监督管理总局技术保障专项项目（2019YJ018）；
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将CRISPR/Cas12b与环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法相结合，应用于乳粉中克罗诺杆菌属的检测。通过基因组比较寻找克罗诺杆菌菌株基因内部的候选保守序列，针对克罗诺杆菌属特异性关键基因序列设计LAMP引物和向导RNA靶向序列，对其进行条件优化、特异性检测，并用人工污染样品对体系的灵敏度、重复性进行验证。结果表明该方法具有良好的特异性，方法的灵敏度达到了0.1 pg/μL；人工污染样品可检测到初始菌量＜10 CFU/g的样品，方法检出限为＜10 CFU/100 g。将该方法应用于51份市售乳粉样品以及52份模拟生产环境样品的检测，结果与传统国标方法一致，并且大幅缩短了实验时间。该方法可用于乳粉中克罗诺杆菌属的快速检测。
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