【摘 要】
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目的 观察靶向下调Bmi-1基因对人胰腺癌细胞(PANC-1)细胞增殖、p16启动子甲基化、p16表达的影响.方法 构建反义Bmi-1真核表达载体转染人人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光倒置显微镜观察、Western blot技术检测靶基因沉默效率；运用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测p16基因表达；甲基化特异性聚合酶链
【机 构】
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430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,湖北省生物靶向治疗研究重点实验室,430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协
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目的 观察靶向下调Bmi-1基因对人胰腺癌细胞(PANC-1)细胞增殖、p16启动子甲基化、p16表达的影响.方法 构建反义Bmi-1真核表达载体转染人人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光倒置显微镜观察、Western blot技术检测靶基因沉默效率；运用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测p16基因表达；甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测p16启动子甲基化变化.结果 荧光倒置显微镜观察转染后48 h细胞转染效率在90％左右；细胞周期出现阻滞(G0/G1期细胞由40.52％上升至60.48％,P＜0.05)、凋亡增加(由7.87％上升至21.67％,P＜0.05)；Bmi-1蛋白表达水平明显下降[吸光度(IA)值318.54±1.21到175.39±0.73,P＜0.05]；p16启动子甲基化水平降低而p16基因RNA(从3.563±0.128上升到8.621±0.310,P＜0.05)及蛋白质表达上升(IA值213.38±0.54到304.12±0.76,P＜0.05).结论 本实验构建的反义Bmi-1载体能够有效沉默细胞中靶基因的表达,抑制细胞增殖；Bmi-1很可能通过甲基化的方式对p16的表达进行调控。
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