目的 研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制.方法 实验研究.构建Wnt3a cDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞中,对照组转入pcDNA3-HA表达载体,蛋白印迹法测定验证过表达效果；蛋白印迹法及免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中β-catenin的表达和定位变化,以及细胞上皮表型标记物E-cadherin和间质表型标记物纤维连接蛋白的表达；体外划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Wnt3a过表达对SRA01/04细胞的迁移运动能力的影响.组间计量资料的比较,采用Student's t检验分析.结果 通过构建人Wnt3a cDNA表达载体获得Wnt3a过表达的Wnt3 a/SRA01/04细胞及对照pcDNA3-HA/SRA01/04细胞.Wnt3a过表达促使SRA01/04细胞内的β-catenin细胞定位由胞质转入胞核；使晶状体上皮细胞发生上皮间充质转化(上皮表型E-cadherin表达降低,间质表型纤维连接蛋白表达升高).体外划痕试验中划痕24 h后测得Wnt3 a/SRA01/04细胞的迁移距离是(0.36 ±0.02)mm,明显高于对照组(t=21.98,P＜0.01)；Transwell小室迁移试验中48 h后穿过聚碳酸酯膜的Wnt3 a/SRA01/04细胞数为(92.25±10.34)个,明显多于对照组(t=10.40,P ＜0.01),证明Wnt3 a/SRA01/04细胞的运动迁移能力大大增强.结论 在人晶状体上皮细胞SRA01/04中,Wnt3a过表达使Wnt/β-catenin信号通路活化,诱导细胞发生上皮间充质转化,增强运动迁移能力。
Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的研究
【摘 要】
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目的 研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制.方法 实验研究.构建Wnt3a cDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞中,对照组转入pcDNA3-HA表达载体,蛋白印迹法测定验证过表达效果；蛋白印迹法及免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中β-catenin的表达和定位变化,以及细胞上皮表型
【机 构】
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300020天津医科大学眼科临床学院天津市眼科医院天津市眼科研究所天津市眼科学与视觉科学重点实验室,300020天津医科大学眼科临床学院天津市眼科医院天津市眼科研究所天津市眼科学与视觉科学重点实验室,
【发表日期】
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2012年48期
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