【摘 要】
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目的 建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours 1)的胆囊癌细胞系GBC-SD,研究其迁移能力并探讨分子机制.方法 以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBTl的胆囊癌细胞系.细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染DMBT1组;(2)GBC-SD/Vector为转染空载体组;(3)GBC-SD为未处理组.免疫组化、Western
【机 构】
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200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,2000
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目的 建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours 1)的胆囊癌细胞系GBC-SD,研究其迁移能力并探讨分子机制.方法 以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBTl的胆囊癌细胞系.细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染DMBT1组;(2)GBC-SD/Vector为转染空载体组;(3)GBC-SD为未处理组.免疫组化、Western blot及RT-PCR检测DMBT1蛋白、mRNA表达,确证转染成功,划痕法与Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot检测E-钙粘蛋白、CD44V6、CD15等黏附转移分子表达.统计学采用配对或独立样本t检验,P＜0.01为差异有统计学意义.结果 稳定转染后,实验组DMBT1蛋白及mRNA表达较对照组分别提高3.2倍、2.7倍;划痕法显示实验组细胞在迁移距离、迁移速率、迁移面积均显著小于对照组(P＜0.01);Tnmswell法表明转染DMBT1后,迁移细胞数亦显著少于对照组(P＜0.01);免疫印迹表明转染实验组较对照组E-钙粘蛋白表达上调,CD15表达量减少(P＜0.01),而CD44V6、α与β连环素、整合素α5在转染前后表达量无明显差异.结论 在体外成功建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系;DMBT1在体外过表达显著抑制GBC-SD的迁移,至少部分依赖于上调E-钙粘蛋白表达,下调CD15表达。
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