【摘 要】
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目的 观察异甘草素(ISL)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞所构建的体外肺纤维化模型的影响,探讨其作用机制.方法 TGF-β1刺激A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)构建体外肺纤维化模型;加入ISL干预后,噻唑蓝(MTT)法检测TGF-β1刺激A549细胞后,ISL对细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测EMT相关E-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN及其相关转录因子Sn
【机 构】
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湖北医药学院附属太和医院呼吸与危重症医学科,十堰442000;湖北医药学院基础医学院免疫教研室,十堰442000;湖北医药学院附属太和医院呼吸与危重症医学科,十堰442000;锦州医科大学十堰市太和医
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目的 观察异甘草素(ISL)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞所构建的体外肺纤维化模型的影响,探讨其作用机制.方法 TGF-β1刺激A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)构建体外肺纤维化模型;加入ISL干预后,噻唑蓝(MTT)法检测TGF-β1刺激A549细胞后,ISL对细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测EMT相关E-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN及其相关转录因子Snail、Slug、 Twist、ZEB1、ZEB2 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN及MAPK/Erk信号通路中Erk1/2磷酸化蛋白的表达水平.结果 TGF-β1可使A549细胞形态由上皮细胞向成纤维细胞转变,细胞增殖及迁移能力增强(P＜0.05或P＜0.01);上皮细胞标志物E-cadherin表达降低,间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN表达升高;EMT相关转录因子及磷酸化Erk1/2表达升高(P＜0.05或P＜0.01).而经ISL处理后,ISL能有效抑制TGF-β1诱导的A549细胞的增殖、迁移及细胞形态变化(P＜0.05或P＜0.01);提高E-cadherin,降低N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN、EMT相关转录因子及磷酸化Erk1/2的表达水平(P＜0.05或P＜0.01).结论 ISL通过干预MAPK/Erk信号通路,抑制TGF-β1诱导的A549细胞的EMT过程,维护细胞上皮样形态,减少肺成纤维细胞的产生,有望成为治疗肺纤维化的一种潜在药物.
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