目的建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中盐酸美沙酮及其代谢产物乙二胺二甲基次磷酸（2-ethylidene-1,5-dimethyl-3,3-diphenylpyrrolidine,EDDP）的含量。方法以地西泮为内标,大鼠血浆用乙腈沉淀蛋白,运用UPLC-MS/MS检测大鼠灌胃盐酸美沙酮6 mg·kg-1后血浆中美沙酮和EDDP的血药浓度,并对数据进行分析。结果大鼠血浆中盐酸美沙酮和EDDP的定量限均为0.5 ng·m L^-1;线性相关系数r>0.999;日内精密度和日间精密度的RSD均<15%;绝对回收率均>85%,相对回收率在90%¹10%之间;基质效应在92.80%⁹7.71%之间。主要药动学参数:美沙酮、EDDP在大鼠血浆中的消除半衰期（t1/2）为（1.479±0.839）,（2.590±0.760）h;最高血药浓度（Cmax）为（48.562±10.501）,（25.542±3.706）mg·L^-1;平均滞留时间（MRT0-t）为（3.476±0.310）,（3.883±0.514）h;曲线下面积（AUC0-t）为（204.036±61.145）,（86.031±15.287）mg·h·L^-1;清除率（CL）为（32.338±14.343）、（70.137±10.786）L·h-1·kg-1,各项药动学参数比较差异均有统计学意义。结论该法专属性强、分离完全、快速灵敏,适用于大鼠血浆中盐酸美沙酮及其代谢产物EDDP的含量测定和药动学研究。