【摘 要】
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[目的]研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体1反义RNA 1(tyrosine protein kinase transmembrane recep-tor 1 antisense RNA 1,ROR1-AS1)调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.[方法]实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达
【机 构】
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西安交通大学医学院附属三二○一医院,陕西汉中723000;西安交通大学附属第一医院,陕西西安710061
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[目的]研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体1反义RNA 1(tyrosine protein kinase transmembrane recep-tor 1 antisense RNA 1,ROR1-AS1)调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.[方法]实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化.乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC(转染 shRNA 对照)、sh-ROR1-AS1(转染 ROR1-AS1 shRNA)、sh-ROR1-AS1+Jagged1 组(转染ROR1-AS1 shRNA,Notch1通路激活剂Jagged1处理).CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9,C-Caspase-9)、上皮型钙黏蛋 白(E-cadherin)、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3,C-Caspase-3)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、Notch1、Hes1 蛋白表达.[结果]乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361 细胞中 ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞(P＜0.05).与对照组、sh-NC组比较,sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00％±9.82％,99.74％±12.05％,58.91％±6.33％),细胞凋亡率升高(4.81％±0.26％,4.93％±0.34％,20.58％±2.11％),细胞迁移数目(225.36±12.84个,224.89±19.56个,140.89±13.64个)和侵袭数目(180.47±16.32个,177.54±16.92个,110.44±10.87个)减少,细胞中 C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加,N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低(P＜0.05).与sh-ROR1-AS1组比较,sh-ROR1-AS1+Jagged1 组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00％±11.58％vs147.36％±12.05％),细胞凋亡率降低(19.54％±1.74％vs 8.36％±0.75％),细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目(107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个)均升高,C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低,N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高(P＜0.05).[结论]下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力,激活细胞凋亡.
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