【摘 要】
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目的探讨巨噬细胞雄激素受体（androgenreceptor，AR）是否通过调控白细胞介素（interleukin，IL）-1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化。方法采用人单核细胞系THP-1细胞，利用染色质免疫沉淀实验检测AR是否与IL-1β启动子的雄激素受体元件（androgenreceptorelement，ARE）序列结合，通过荧光素酶分析实验检测AR是否调控IL-1β基因表达。基因沉默THP-1细胞的AR，用携带载体或shRNA的慢病毒转染THP-1细胞，流式细胞术分选出带荧光标记的阳性
【机 构】
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天津医科大学第二医院肾脏病血液净化科，天津 300211天津医科大学第二医院肾脏病血液净化科，天津 300211天津医科大学第二医院泌尿外科，天津 300211天津医科大学第二医院肾脏病血液净化科，天
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目的探讨巨噬细胞雄激素受体（androgen receptor，AR）是否通过调控白细胞介素（interleukin，IL）-1β基因表达影响高磷诱发的血管平滑肌细胞钙化。
方法采用人单核细胞系THP-1细胞，利用染色质免疫沉淀实验检测AR是否与IL-1β启动子的雄激素受体元件（androgen receptor element，ARE）序列结合，通过荧光素酶分析实验检测AR是否调控IL-1β基因表达。基因沉默THP-1细胞的AR，用携带载体或shRNA的慢病毒转染THP-1细胞，流式细胞术分选出带荧光标记的阳性转染细胞THP-1ARsc（对照组）和THP-1ARsi（沉默单核细胞AR），Western印迹法检测THP-1ARsc、THP-1ARsi细胞的AR表达水平，通过佛波酯（50 ng/ml）诱导获得巨噬细胞MФARsc（对照组）或MФARsi（沉默巨噬细胞AR），酶联免疫吸附试验检测MФARsc或MФARsi条件培养基的IL-1β表达水平。用MФARsc或MФARsi的条件培养基加入磷酸盐（磷酸二氢钠，终浓度2.5 mmol/L）后对人主动脉平滑肌细胞（human aortic smooth muscle cells，HASMC）进行培养，茜素红S染色分析HASMC的钙化情况，Western印迹法检测成骨细胞标志物RUNX2和HASMC标志物SM22α的表达水平；中和实验分析IL-1β介导巨噬细胞AR对HASMC钙化的影响。
结果AR与IL-1β启动子的ARE序列结合并调控IL-1β基因表达。与MФARsc细胞比较，MФARsi细胞条件培养基的IL-1β蛋白表达水平显著下降（P
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