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目的:构建人锌转运体8(zinc transporter 8,ZnT8)嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的慢病毒表达载体,为研究抗原特异性调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)自身免疫中的调节作用提供实验基础。方法:通过分子克隆及基因重组技术构建PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体质粒,并制备ZnT8 scfvCAR慢病毒;利用ZnT8 scfv-CAR慢病毒感染Tregs,流式细胞术检测绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达确定慢病毒感染效率;细胞计数评估Tregs细胞增殖能力;流式细胞术检测增殖细胞中CD4、CD25、Foxp3和Helios的表达。结果:酶切鉴定和基因测序结果显示PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体构建成功;质粒共转染293T细胞后制备浓缩慢病毒滴度为2.4×10~8TU/μL;ZnT8 scfv-CAR慢病毒转染Tregs后GFP表达率为43.2%±4.1%;体外培养14 d后ZnT8特异性Tregs增殖(634.3±92.5)倍,且高表达Foxp3(60.4%±3.5%)和Helios(64.3%±4.8%)。结论:成功构建了包含CAR结构的PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒载体并包被ZnT8 scfv-CAR慢病毒;慢病毒转染后的CAR-Tregs体外扩增14 d仍能够维持ZnT8-CAR结构表达;CARTregs为一群CD4~+CD25~+细胞且高表达Foxp3和Helios。