【摘 要】
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为探究促凋亡蛋白Bak/Bax对erastin诱导铁死亡的调控机制，以野生型（WT）、Bak/Bax双敲除（Bak/Bax-DKO）、Bax敲除（Bax-KO）和Bak敲除（Bak-KO）的小鼠成纤维细胞（MEFs）为实验对象，利用CCK-8和流式细胞术检测细胞存活率和活性氧（ROS）的生成量，利用试剂盒测定GSH/GSSG水平，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹（Weste
【基金项目】
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安徽省重点研发计划项目（202104a07020006）；
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为探究促凋亡蛋白Bak/Bax对erastin诱导铁死亡的调控机制，以野生型（WT）、Bak/Bax双敲除（Bak/Bax-DKO）、Bax敲除（Bax-KO）和Bak敲除（Bak-KO）的小鼠成纤维细胞（MEFs）为实验对象，利用CCK-8和流式细胞术检测细胞存活率和活性氧（ROS）的生成量，利用试剂盒测定GSH/GSSG水平，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测相关基因和蛋白的表达水平。结果显示：与野生型细胞相比，敲除Bak和Bax显著抑制erastin诱导的铁死亡，RT-qPCR和Western Blot检测发现，相比WT细胞，Bak/Bax-DKO细胞中核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白、GPX4 mRNA表达水平明显升高。进一步研究发现：与Bak/Bax双敲除类似，敲除Bax也显著抑制erastin诱导的铁死亡，促进GPX4的蛋白表达水平；而敲除Bak对erastin诱导的铁死亡及GPX4的蛋白表达水平无明显影响。结果表明，促凋亡蛋白Bax和Bak通过Nrf2/GPX4信号通路抑制erastin诱导的铁死亡，且Bax在其中起主导作用。
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