探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响，并初步分析其分子机制。
方法采用含体积分数10%FBS的RPMI 1640培养液(简称培养液)常规培养HaCaT细胞。(1)取对数生长期细胞，按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200 nmol/L雷帕霉素组，每组6孔。5个雷帕霉素组细胞分别加入含相应质量浓度雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含二甲基亚砜(DMSO)的培养液。常规培养4 h后，采用酶标仪检测细胞增殖活性(以吸光度值表示)。(2)取对数生长期细胞，同实验(1)分组培养，每组1孔。常规培养4 h后，在活细胞工作站下观察各组细胞3 h内运动范围，计算细胞曲线运动速度，筛选雷帕霉素适宜实验浓度。(3)取对数生长期细胞，按随机数字表法将其分为雷帕霉素组和对照组，每组1孔。雷帕霉素组细胞加入含50 nmol/L雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含DMSO的培养液。常规培养4 h后行划痕实验，观察划痕后0(即刻)、5、10、15 h的划痕面积并计算后3个时相点的细胞迁移率。(4)取对数生长期细胞，同实验(3)分组培养，每组1孔。用蛋白质印迹法检测细胞黏着斑激酶(FAK)活性(以磷酸化FAK与FAK灰度值比值表示)。上述实验重复3次或5次。对数据行单因素方差分析、LSD检验、t检验。
结果(1)对照组及1、5、50、100、200 nmol/L雷帕霉素组细胞增殖活性分别为1.22±0.28、1.29±0.38、1.12±0.27、1.20±0.29、1.15±0.30、1.39±0.40，组间比较差异无统计学意义(F＝2.112，P＝0.068)。(2)1、5 nmol/L雷帕霉素组细胞的运动范围与对照组接近，其余3个雷帕霉素组细胞的运动范围明显小于对照组。组间细胞曲线运动速度总体比较，差异有统计学意义(F＝3.525，P＝0.004)。1、5 nmol/L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为(0.8±0.4)、(0.8±0.8)μm/min，与对照组[(0.9±0.5)μm/min]相近(P值均大于0.05)；50、100、200 nmol/L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为(0.7±0.5)、(0.7±0.4)、(0.7±0.4)μm/min，明显慢于对照组(P值均小于0.01)。选择50 nmol/L雷帕霉素用于后续实验。(3)划痕后0、5 h，雷帕霉素组细胞划痕面积与对照组相近；划痕后10、15 h，雷帕霉素组细胞划痕面积较对照组大。划痕后5 h，对照组及雷帕霉素组的细胞迁移率分别为(17.5±2.6)%、(15.8±3.5)%，组间比较差异无统计学意义(t＝1.951，P>0.05)。雷帕霉素组划痕后10、15 h的细胞迁移率分别为(42.5±4.0)%、(71.3±9.2)%，明显低于对照组的(46.9±6.7)%、(88.0±7.7)%，t值分别为2.732、6.746，P值均小于0.01。(4)雷帕霉素组细胞FAK活性为0.16±0.08，明显低于对照组的0.46±0.14，t＝4.967, P<0.01。
结论在HaCaT细胞中，FAK信号通路对雷帕霉素敏感，FAK活性下降可能参与介导雷帕霉素对HaCaT细胞迁移的抑制效应。