【摘 要】
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目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制.方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型.然后用Western blotting和免疫组织化学染色
【机 构】
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南华大学医学院心血管病研究所,动脉硬化学湖南省重点实验室,湖南,衡阳,421001;新乡医学院病理学教研室,河南,新乡,453003;吉首大学医学院基础医学部,湖南,吉首,416000;美国北卡罗来纳
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目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制.方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型.然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达.THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag(R) assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性.在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化.瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型.在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变.结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加.负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高.荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少.高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积.加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱.结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积.
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