【摘 要】
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目的 评价重组杜氏利什曼原虫延伸因子1-α(recombinant Elongation factor 1-α,rEF 1-α)和β-微管蛋白(recombinantβ-tubulin,rβ-tubulin)的免疫刺激效应及诱导免疫应答
【机 构】
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川北医学院免疫学与分子生物学研究所,四川南充,637000;川北医学院第二临床医学院
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目的 评价重组杜氏利什曼原虫延伸因子1-α(recombinant Elongation factor 1-α,rEF 1-α)和β-微管蛋白(recombinantβ-tubulin,rβ-tubulin)的免疫刺激效应及诱导免疫应答类型. 方法 从杜氏利什曼原虫四川人分离株基因组中扩增EF 1-α、β-tubulin基因,以分子克隆技术构建pQE30-EF 1-α、pQE30-β-tubulin重组质粒.将酶切与测序鉴定正确的重组子转化E.coil M15菌株,用IPTG诱导表达rEF 1-α和rβ-tubulin,表达产物经镍柱亲和层析纯化后辅以弗氏佐剂制成疫苗免疫BALB/c小鼠,采用Western blot法检测小鼠抗血清的特异性,ELISA法检测抗血清效价.分离各组小鼠脾细胞,体外培养60 h后再次接受相同抗原刺激,检测IL-4、IL-12、IFN-γ水平. 结果 重组菌表达的rEF 1-α、rβ-tubulin均以包涵体形式存在,两表达产物免疫小鼠后获得的抗血清均具有特异性,效价分别为1∶800和1∶1 600.rEF 1-α、rβ-tubulin免疫小鼠脾细胞培养上清IL-4含量均高于对照组(P＜0.05),IL-12、IFN-γ与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 成功表达了杜氏利什曼原虫rEF 1-α、rβ-tubulin,两种重组蛋白均可诱导Th2型免疫应答.
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