酵母蛋白酶A活性中心突变对蛋白酶A酶活力及菌株生长情况的影响

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蛋白酶A由PEP4基因编码,对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用,蛋白酶A缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。利用重叠延伸法构建了蛋白酶A第294位活性中心突变的PEP4基因表达载体,同时构建了野生型PEP4基因表达载体,并分别将两种表达载体转化到基因背景为PEP4缺失的菌株中。研究发现,蛋白酶A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶A缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶A活力,而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶A活力与出发菌株基本一致。结果表明,活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致;通过生长曲线的观察发现蛋白酶A活性中心点突变会导致生长速率的减慢。本研究对于工业菌株无痕敲除、提高应用安全性方面具有理论指导意义。
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