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研究目的结合本课题组的前期研究,通过自行设计引物、探针,建立与评价侵袭性曲霉菌病AllGlo荧光PCR诊断技术,以期为侵袭性曲霉菌病提供快速、准确的早期诊断方法。研究方法⑴利用Blast和DNAMAN软件工具在GeneBank数据库中查找黄曲霉、烟曲霉的高度保守序列。通过Primer Express2.0软件对找出的目的基因序列进行自行设计AllGlo荧光PCR引物和探针;制备标准品并制定AllGlo荧光PCR定量标准曲线,进行评价。⑵模拟曲霉菌性菌血症,分别采用Lyticase酶消化法、玻璃珠-盐析法和QIAamp-S法提取真菌DNA,分析比较三种方法的提取效率。⑶收集临床血液标本,进行DNA提取,并进行AllGlo荧光PCR单盲检测,与实验室传统的血培养和GM实验检测结果进行比较分析。研究结果⑴:AllGlo荧光PCR定量标准曲线:Y∧=-3.003Χ+36.825,R2=0.981(黄曲霉);Y∧=-3.052Χ+38.016,R2=0.994(烟曲霉)。敏感度达10CFU/ml。AllGlo荧光PCR检测的批内和批间的变异系数小,重复性好,且特异性高。⑵:3种方法提取的DNA A260/A280无差别(P>0.05);Lyticase酶消化法和玻璃珠-盐析法的提取效率高于QIAamp-S法(P<0.001),而Lyticase酶消化法和玻璃珠-盐析法的提取效率无差别(P>0.05)。⑶:AllGlo荧光PCR检测阳性预测值和阴性预测值均明显高于GM实验,敏感度无差别(P>0.05),而特异性优于GM实验(P<0.05)。与血培养的诊断效能比较分析结果表明血培养的特异性较高,但是敏感性低于AllGlo荧光PCR技术。研究结论成功建立了侵袭性曲霉菌病AllGlo荧光PCR诊断技术,具有较高的敏感度和特异度,重复性好。检测高度疑似曲霉菌感染病人的全血标本,有较高的准确度、阳性预测值和特异性。