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我们先前的初步研究表明红细胞HNMT活性在中国汉族人群中呈正态分布,个体差异达5.5倍,而且存在显著的性别差异(男>女).为了进一步阐明导致HNMT酶活性个体差异的遗传及非遗传因素,以及HNMT遗传多态性与疾病易感性的关系,我们对HNMT进行了一系列的深入研究并将结果在该论文中逐一报告.首先,我们研究了HNMT基因C314T和A595G两个潜在的错义突变在中国人群中的发生频率及其与HNMT酶活性表型的相关性;随后,我们采用直接测序法对HNMT基因编码区及相关调控区域内的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分布及其连锁不平衡关系进行了系统的分析,并通过基因型—表型相关分析对新筛选到的多个高频突变位点进行了初步的功能分析;其次,我们考察了年龄及女性月经周期两种生理因素对红细胞HNMT活性的影响;然后,我们对新筛选到的3个常见SNP建立了简便的PCR-RFLP基因分型方法,并以C314T和这些新的SNPs为遗传标记,采用病例一对照研究的分子流行病学方法探讨了HNMT基因多态性与原发性高血压病和溃疡病易感性之间的关系;最后,我们还对人类膜结合型HNMT异构体的存在可能性进行了初步探讨.这一系列研究的结果表明:(1)C314T突变是中国人群中具有功能意义的常见SNP,但其发生频率显著低于美国人群,而且该突变也不能完全解释人群中HNMT酶活性表型的个体差异.(2)在中国汉族人群中发现HNMT基因存在6个常见SNP(T-1637C、T-463C、C-41 1T、C314T、A939G和A1097T),其中T-1637C、C-411T和A1097T为首次报道,这些SNPs之间大多处于连锁不平衡状态,基因型—表型相关分析表明T-1 637C(或T-463C)和A939G(或A1097T)可能在一定条件下具有功能意义;(3)HNMT酶活性及其性别差异受到年龄因素的显著影响,儿童的HNMT酶活性显著低于成年人,HNMT酶活性的性别差异仅存在于青年人群中;(4)HNMT酶活性受到女性月经周期的影响,月经期的HNMT酶活性显著低于排卵期和黄体期,而且HNMT酶活性与体内雌激素水平之间存在显著相关;(5)高血压病患者的C314T突变频率显著低于正常对照,提示与HNMT低酶活性或高组胺水平相关的C314T功能突变可能作为高血压病的保护因素;(6)以T-1637C、C-411T、C314T和A1097T四个代表性SNP及其所构成的单倍型(haplotype)为遗传标记,未发现HNMT基因多态性与溃疡病易感性之间存在相关性;(7)在红细胞裂解液制备过程中加入膜蛋白解离剂Triton X-100可显著增强HNMT酶活性,提示红细胞膜上很可能存在一种膜结合型HNMT异构体.