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目的:采用新型模式生物斑马鱼为模型,研究中药新阿胶对化疗引起免疫损伤、造血抑制的保护作用及机制,为新阿胶的抗肿瘤临床应用提供理论基础和实验依据。方法:选取受精后2 h(hours post fertilization,hpf)的AB系野生型斑马鱼胚胎为实验材料,用不同浓度的新阿胶溶液处理一定时间,观察新阿胶对斑马鱼胚胎的死亡、孵化及发育畸形的影响,考察新阿胶在斑马鱼模型的耐受剂量浓度范围。采用48 hpf中性粒细胞荧光标记的转基因斑马鱼为实验动物,在荧光显微镜下进行成像,图像采用Image Pro Plus软件对鱼体躯干部中性粒细胞进行计数,考察阳性药物长春瑞滨、雷帕霉素、氯霉素在斑马鱼模型上的响应,建立免疫功能评价模型;采用48 hpf的血小板荧光标记的转基因品系、24 hpf的AB系斑马鱼为实验动物,采用荧光显微成像、邻联茴香胺染色(o-Dianisidine染色)等方法,考察阳性药物甲氨蝶呤、多柔比星及氮芥盐酸盐等在斑马鱼模型上的响应,建立造血功能评价模型。采用上述斑马鱼模型,加入新阿胶处理一定时间后,通过斑马鱼中性粒细胞数、血小板数、斑马鱼体内吞噬墨汁颗粒巨噬细胞数、红细胞数,考察新阿胶对斑马鱼免疫和造血损伤模型的保护作用;并采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time-PCR,qPCR)方法检测斑马鱼免疫相关因子il-6、il-8、il-10、tnf-ɑ、ifn-γ,以及造血表达相关因子scl1、c-myb、gata1、pu.1,runx1的mRNA表达量水平。结果:在斑马鱼耐受性考察试验中,新阿胶浓度介于0-100μg·mL-1时,斑马鱼胚胎的死亡率、孵化率及畸形率无明显变化;而浓度高于200μg·mL-1时,对斑马鱼胚胎的发育表现出了一定的影响,如孵化率降低、死亡率升高等。在本实验条件下,已知的免疫抑制剂长春瑞滨、雷帕霉素、氯霉素可明显的抑制72 hpf斑马鱼幼鱼的中性粒细胞的数量,并呈现一定量效关系;已知的造血抑制剂甲氨蝶呤、多柔比星及氮芥盐酸盐等也可明显抑制斑马鱼幼鱼血小板、红细胞的生成数量,说明斑马鱼模型能够比较灵敏地表征化疗等原因引起的免疫损伤及造血障碍。在实验剂量范围内,新阿胶显著逆转了长春瑞滨、雷帕霉素、氯霉素诱导的斑马鱼体内中性粒细胞数量的降低,也显著增强了斑马鱼巨噬细胞吞噬墨汁颗粒的能力,表明新阿胶对化疗等药物引起的免疫损伤具有一定的保护作用。qPCR检测结果显示,长春瑞滨处理后,il-6、il-8、il-10以及ifn-γ基因的mRNA表达量水平均存在不同程度的下调,而tnf-ɑ的表达量则显著上升,给予新阿胶处理后,il-6、il-8、il-10、ifn-γ基因的mRNA表达量升高,同时降低了tnf-ɑ的表达量,提示新阿胶对免疫损伤的保护作用可能与上述因子有关。在实验剂量范围内,新阿胶显著逆转了长春瑞滨、氯霉素诱导的斑马鱼体内血小板数量的降低,显著提高了甲氨蝶呤、多柔比星及氮芥盐酸盐造成的红细胞生成数量的减少,表明新阿胶对化疗药物引起的造血障碍具有一定的保护作用。qPCR检测结果显示,甲氨蝶呤显著下调了促造血干细胞生成相关基因scl1、gata1以及转录因子c-myb的表达量,而造血过程中影响造血干细胞向髓系细胞分化的pu.1基因表达量则显著上升,与免疫因子相似,新阿胶处理后,scl1、gata1及c-myb的表达量随给药浓度增加而上升,提示新阿胶对造血障碍的保护作用可能与上述因子相关。结论:斑马鱼模型可以较好地表征化疗药物导致的免疫、造血损伤,使用样品量少、试验周期短,为深入研究该类药物的活性提供了新的实验方法。首次利用该模型研究了中药新阿胶对化疗后免疫和造血功能的保护作用,为新阿胶与化疗药物联合应用于恶性肿瘤的治疗提供了理论基础和实验依据。