孤独症（autism）是儿童广泛性发育障碍（pervasive developmental disorder，PDD）的一种类型，男女比例为4～10：1。起病于婴幼儿期，主要表现为不同程度的言语发育障碍、人际交往障碍、兴趣狭窄和行为方式刻板。孤独症属于多基因遗传病，有较高的遗传异质性。 定位克隆方法在单基因遗传性疾病研究中的成功运用，激发了人们研究多基因疾病的希望和热情，定位克隆作为一种成熟的技术方法，可以揭示精神疾病的遗传病因。我们采用了Barcellos（1997）等提出的用DNA混合池全基因组扫描关联分析方法，完成了对山东省38例儿童孤独症患者，患儿父母以及1000例正常对照者的全基因组扫描关联分析研究，共发现了4个关联位点。 目的:用DNA混合池（DNA pooling）的方法，通过覆盖全基因组的400个微卫星遗传标记（STR）对儿童孤独症患者、父母以及正常对照者进行基因组扫描，寻找与本病关联的遗传位点。 对象和方法: 1、对象 采用国际精神疾病诊断标准ICD-10作为儿童孤独症的诊断标准，选择在山东省精神卫生中心就诊的孤独症患儿38例，患儿父母75例，对照组选择了山东省血液中心的献血者1000例。 2、方法 2．1 采用传统的酚-氯仿法提取被试者外周静脉血基因组DNA。采用BECKMAN，DU530紫外分光光度仪（美国贝克曼公司）测定DNA浓度。用双蒸水将DNA样品稀释至终浓度20 ng/μL。 2．2 每个样本取10μL浓度为20 ng/μL的DNA溶液进行混合，分别构建患儿组，父母组和对照组DNA混合池。 2．3 选用美国应用生物系统公司（Applied Biosystem，ABI）的Linkage Mapping Set2．5试剂盒，共400对微卫星引物，其平均遗传间距为10 cM（厘摩）。逐一对38例孤独症患者、75例患者父母与1000例正常对照者组成的DNA混合池样本进行DNA扩增，然后在3100 Avant（Applied Biosystem，ABI）毛细管遗传分析仪上进行基因组扫描，用Genemapper4．0软件进行基因分型。 3、统计学处理混合池DNA样本经PCR扩增和基因分型后，可产生由一系列等位基因构成的等位基因图谱（allele image pattern，AIP）。采用Clump2．3软件对患儿组、父母组和正常对照组每个位点上的等位基因频率进行计算，分别比较患儿组与父母组，患儿组与正常对照组之间基因频率的差异，以P<0．01作为差异有显著性的标准，确定关联遗传位点。 结果: 通过反复实验，我们最终获得了所有400个位点的基因分型。其中D2S2382与D5S2115位点在该人群中的等位基因只有一种，无多态性。在1号染色体上的D1S214，4号染色体上的D4S392、D4S1535，7号染色体上的D7S513，患者组与患者父母组或正常对照组统计分析计算的P值<0．01，差异有显著性意义，显示与孤独症存在关联。 结论: 山东省人群的孤独症患者中在1p36．31，4q13．3，4q35．1，7p21．3区域存在关联位点（D1S214，D4S392，D4S1535和D7S513），为进一步在关联区域附近筛查致病基因打下了基础。