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本实验室之前的研究发现,缺氧/复氧(H/R)诱导原代培养心肌细胞核转录因子NF-κB p65入核,导致下游两种粘附分子ICAM-1,VCAM-1表达量增加,引起心肌细胞炎症反应。而雌激素(E2)通过抑制p65入核来降低ICAM-1,VCAM-1表达量,从而实现心肌保护作用。IκBα是NF-κB抑制蛋白IκB蛋白家族的主要成员,在调节NF-κB信号通路的激活和失活中起重要作用。因此,我们设计了这个实验用于检验雌激素对原代培养心肌细胞IκBα的影响。[实验目的]研究雌激素对缺氧/复氧后心肌细胞IκBα蛋白磷酸化、表达以及细胞内定位的影响,从而检验雌激素是否是通过调节细胞内IκBα来发挥抗炎作用。[实验方法]利用原代培养心肌细胞和已经检验建立成功的缺氧/复氧模型模拟心脏缺血再灌注,设立雌激素(5μM)孵育时间梯度(2h,4h,6h和8h),应用RT-PCR技术检测IκBαmRNA表达水平;western blot检测IκBα蛋白磷酸化(p-IκBα)水平、IκBα蛋白表达水平以及IκBα蛋白在胞浆和胞核中的量。[实验结果]与对照组比较,缺氧/复氧后心肌细胞内IκBα磷酸化水平显著增加,mRNA和蛋白表达水平以及胞核中IκBα蛋白水平显著降低。与缺氧/复氧组比较,缺氧/复氧后孵育雌激素,细胞内IκBα磷酸化水平显著降低,而IκBαmRNA和蛋白表达水平以及胞核中IκBα蛋白水平显著增加。[结论]雌激素通过抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞内IκBα蛋白磷酸化,促进IκBαmRNA和蛋白表达使细胞中IκBα蛋白保持一个相对稳定且较高的水平;同时雌激素还可以通过促进IκBα蛋白入核,使细胞核中活化的NF-κB失活,从而促进NF-κB由细胞核中输出,终止炎性因子转录反应,保护心肌细胞免受炎症反应的伤害,发挥起抗炎作用。