Ⅱ型TA系统yefM-yoeB在杀鱼爱德华氏菌抗逆性和致病性中的作用

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbh0429
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)是威胁全球水产养殖行业的主要病原体之一,可感染牙鲆、大菱鲆和罗非鱼等多种海水及淡水动物,严重制约了水产养殖业的健康发展,它已被认为是研究感染胞内病原菌的模型生物。Ⅱ型毒素-抗毒素(Toxin-Antitoxin,TA)系统在参与细菌病原体适应环境压力、感染宿主的过程中起着重要作用,它可以帮助病原菌提高其致病力。目前Ⅱ型TA系统在多种临床病原菌中被广泛研究,但是有关杀鱼爱德华氏菌Ⅱ型TA系统的研究报道比较少见。在本研究中,我们通过生物信息学分析及共转录分析,确定了杀鱼爱德华氏菌的yefM-yoeB属于Ⅱ型TA系统,其中yefM是抗毒素基因,yoeB是毒素基因。通过构建yoeB和yefM-yoeB基因框内缺失突变株TX01ΔyoeB和TX01ΔyefM-yoeB及yefM-yoeB的回补株TX01ΔyefM-yoeBC,研究了yoeB和yefM-yoeB对杀鱼爱德华氏菌在H2O2、高温及血清中存活能力的影响。试验结果表明,在H2O2中野生株TX01的存活率为78.30%,而TX01ΔyefM-yoeB的存活率仅为30.31%,显著低于野生菌株,而TX01ΔyoeB的存活率为87.56%,与TX01无明显区别;与野生株TX01相比,TX01ΔyefM-yoeB的耐高温能力及抗血清杀伤能力显著增强,其在血清中不仅没有被杀死反而增长了20%,而TX01ΔyoeB的存活率为77.52%,无显著差异;回补株TX01ΔyefM-yoeBC在H2O2、高温及血清中的存活率与野生株TX01无明显差异。上述结果初步证实了yefM-yoeB与杀鱼爱德华氏菌的抗逆性有关。通过检测TX01、TX01ΔyoeB、TX01ΔyefM-yoeB和TX01ΔyefM-yoeBC的生物被膜形成能力、罗非鱼体内感染试验及体外细胞感染试验,研究了yoeB和yefM-yoeB在杀鱼爱德华氏菌致病性中的作用。试验表明,TX01ΔyefM-yoeB的生物被膜的形成能力显著强于TX01;体外感染试验表明,yefM-yoeB的失活显著增强细菌对宿主FG细胞的粘附能力;通过侵染罗非鱼进行鱼体内细菌传播和毒力分析试验发现,与野生株TX01相比,TX01ΔyefM-yoeB感染的鱼脾脏中细菌数升高,感染TX01ΔyefM-yoeB的罗非鱼死亡率为100%,致死率明显增强;而TX01ΔyoeB感染的鱼脾脏中的细菌数无明显变化,且感染20d后存活率为20%与TX01无明显变化;回补株TX01ΔyefM-yoeBC无论是在体内还是体外感染试验中,均与野生株TX01无明显差异。试验结果证实了yefM-yoeB在杀鱼爱德华氏菌致病性中的作用。通过β-半乳糖苷酶活性试验及EMSA试验,分析了yefM-yoeB自身启动子P345与yefM-yoeB的关系。结果显示,DH5α/p SCP345/p T的活性值为2197.07 Miller Units,与其相比,DH5α/p SCP345/p TYefM的活性值无显著差异,为2080.47 Miller Units,而DH5α/p SCP345/p TYefM-YoeB的活性值显著降低,仅为8.28 Miller Units;EMSA试验表明,YefM蛋白可以直接与yefM-yoeB启动子P345结合。试验结果证实了YefM蛋白可直接结合到自身启动子P345上,并且抑制了启动子P345的活性,而YoeB蛋白同YefM蛋白的结合加强了YefM蛋白对启动子P345的抑制作用。综上所述,本研究揭示了杀鱼爱德华氏菌的yefM-yoeB是Ⅱ型TA系统,是该菌抗逆性和致病性的重要参与者,这将有助于进一步阐明该菌对鱼类的致病机制,为杀鱼爱德华氏菌病的防治提供新方法和新思路。
其他文献
近年来,我国奶牛养殖逐渐趋向于规模、集约化的养殖方式,围产期奶牛代谢性疾病的发病率也随之增加。从妊娠后期到泌乳前期,奶牛由干奶过渡到泌乳,易出现能量负平衡(Negative energy balance,NEB),此时奶牛启动脂肪动员,诱发高非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acid,NEFA)血症和高酮血症。高NEFA血症会致使奶牛大量的活性氧(Reactive oxygen
鹅大肠杆菌病(Goose Colibacillosis)是由大肠杆菌引起的急性传染病,俗称“蛋子瘟”。2周龄以内的雏鹅多发,引起败血症、肠炎和脐炎等多种病型;成鹅引起卵黄性腹膜炎,使母鹅产蛋率明显下降。本病具有较强的传染性。近年来由于抗生素的滥用,造成鹅群的发病率逐年增高,给养鹅业带来了巨大的经济损失。鹅源大肠杆菌血清型多,基因型也具有多样性,不同分离株携带的黏附素、摄铁系统、毒力岛、溶血素等毒力
随着全球气候变暖,我国夏季高温强度增加,且持续时间变长,热应激给奶牛生产带来的损害也越来越严重。奶牛通过调整行为、生理和代谢等生理活动,来缓解热应激带来的压力,提高在热应激下的适应性,但这也会降低奶牛的生产性能。丙酸钙作为一种常见的食品饲料添加剂,在促进奶牛瘤胃发育、提高生产性能、调节机体营养代谢和提高免疫功能具有显著的效果,且具有使用安全,方便和价格低廉等优点,越来越受到奶牛养殖业的关注。本研究
VE和Se作为重要的抗氧化剂和免疫增强剂,可以改善奶牛氧化应激和免疫抑制的状况,降低奶牛乳腺炎和子宫炎等重要经济疾病的严重程度。由于围产期奶牛VE和Se的缺乏与奶牛产后炎性疾病发生有着密切联系,加上集约化牛场缺乏现场实用、快速的监测维生素和微量元素的手段,目前亚临床的VE和Se缺乏问题已逐渐成为危害奶牛健康的主要营养代谢病之一。因此,本研究开展了奶牛围产期和泌乳早期VE缺乏和Se缺乏的调查研究,以
牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)是一种感染牛的免疫缺陷病毒,在我国广泛流行。奶牛乳腺炎是制约全球乳品行业发展最重要的疾病之一,乳腺炎致病菌分为“传染性”和“环境性”两种,全世界每年因奶牛乳腺炎造成的经济损失达20亿美元,我国每年因奶牛乳腺炎造成的损失超过3亿元。BLV感染可导致奶牛免疫抑制,但是BLV载量与乳腺炎发病和牛奶品质变化规律之间的关系尚不清楚,因此探究两
前殖吸虫(Prosthogonimus spp.)是家禽和野生鸟类常见的寄生虫,严重地影响着它们的健康。目前对于家禽前殖吸虫的研究主要集中在病例分析、疾病防治等方面,对前殖吸虫在中间宿主内的感染情况以及线粒体核糖体全序列等分子水平的研究还相对较少。因此本研究拟对黑龙江省蜻蜓体内前殖吸虫囊蚴感染情况进行调查,通过动物感染实验获得成虫,并对成虫线粒体全基因组和核糖体全序列进行扩增和分析,探讨前殖吸虫与
目前,苏南地区的经济呈现飞跃性的发展,人们在享受由发展所带来物质生活提升的同时,又需要追求精神生活上的满足。因此,迫切需要苏南地区拓展旅游资源,建设新型旅游载体。花海景观是园林中极具特色的一部分,不仅具有极佳的景观价值,还能带来相当一部分经济效益。本文通过文献调查、实地调研、资料搜集、归纳总结等方法,从花海的植物配植、营建类型以及典型案例入手,较为全面地分析了苏南地区花海的景观特点,最终得出符合苏
菠萝(Ananas comosus(L.)Merr)为凤梨科凤梨属的多年生单子叶草本植物,是我国具地方特色和产业优势的南方热带水果之一。菠萝水心病是一种影响果实品质和贮藏性能的生理性病害,近年来在菠萝主产区大面积发生,降低了产业效益、影响了菠萝产业的可持续发展。目前,菠萝水心病的发病机理尚不清楚。因此,本研究以‘巴厘’正常果(CK)、轻度水心病果(LS)以及中度水心病果(MS)为试验材料,通过转录
试验于2019~2020年5~8月在黑龙江八一农垦大学试验基地进行。试验以芸豆品种“英国红”为试验材料,设置2种灌溉方式和5个氮素施用水平,设2种灌溉方式:常规灌溉(W1)、控制灌溉(W2),常规灌溉的土壤含水量控制在田间持水量的80%,控制灌溉的土壤含水量控制在田间持水量的60%。5个施氮水平(尿素,以纯N计):N0(0 kg/hm2),,N1(25 kg/hm2),N2(30 kg/hm2),
本试验针对东北地区甜菜栽培中前期降水量偏低、氮肥用量不当将造成甜菜产量和品质降低的问题,于2019年和2020年在黑龙江八一农垦大学试验基地进行施氮和定量灌溉试验,旨在为甜菜科学水肥管理提供理论依据。2019年小区试验设N0(0 kg/hm2)、N1(60kg/hm2)、N2(90 kg/hm2)和N3(120 kg/hm2)4个处理;2019年大区试验设T1(空白对照)、T2(N为120 kg/