鸡的卵泡选择是指从一组直径为6～8mm的小黄卵泡（Small yellow follicle,SY）中选出一个进入等级卵泡的过程,受卵泡选择后的卵泡快速发育、排卵并产蛋。卵泡选择是影响鸡产蛋性能的关键因素。据估计,性成熟的母鸡约有12,000个卵母细胞,但其中只有几百个（4%）经卵泡选择发育成熟和排卵。课题组前期发现组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（Lysine（K）-specific demethylase 1,LSD1）第65位丝氨酸的磷酸化（LSD1Ser65p）水平在鸡卵泡选择后的F6卵泡中显著升高,但其功能尚不清楚。据此,本课题拟通过Western blotting、q RT-PCR、免疫沉淀、转录组测序等方法分析LSD1Ser65p修饰的产生机制、去磷酸化对鸡等级颗粒细胞基因表达的影响以及LSD1所调控基因FGF9的功能,结果如下:（1）鸡LSD1Ser65p修饰的产生机制。LSD1Ser65p的修饰通过相应的激酶介导,所以,本研究首先预测了可能使LSD1第65位丝氨酸发生磷酸化的激酶CDK5和GSK3,并且用两个对应的激酶抑制剂分别处理等级卵泡颗粒细胞和膜细胞。结果发现,GSK3的抑制剂能够显著降低等级卵泡膜细胞的LSD1Ser65p水平（P＜0.05）,而等级卵泡颗粒细胞无明显变化;CDK5抑制剂处理的等级颗粒细胞LSD1Ser65p水平显著降低（P＜0.05）,而等级卵泡膜细胞无明显变化。在等级卵泡颗粒细胞中LSD1定位于细胞核内,免疫共沉淀分析证明LSD1第65位丝氨酸的磷酸化存在与CDK5的互作,证明CDK5介导了LSD1Ser65p的修饰。（2）鸡LSD1第65位丝氨酸的去磷酸化对鸡等级卵泡颗粒细胞基因表达的影响。为了进一步研究LSD1Ser65p在鸡卵泡选择中的作用,我们构建了该磷酸化位点的突变载体,并分别转染鸡等级卵泡和等级前卵泡颗粒细胞。发现在转染后的等级卵泡颗粒细胞中,LSD1Ser65p的水平显著降低（P＜0.05）,而等级前卵泡颗粒细胞无显著变化。对转染该突变载体的等级卵泡颗粒细胞进行了转录组测序,以|log2（Fold Change）|＞1,q value＜0.05作为筛选差异基因的标准,共筛选出上调基因23个,下调基因7个。生物信息学分析表明,差异基因参与的生物过程集中于成纤维细胞因子受体的结合、生长因子活性等方面。（3）鸡LSD1第65位丝氨酸去磷酸化对鸡卵泡选择相关基因启动子区组蛋白H3K4二甲基化（H3K4me2）的影响。针对与卵泡选择相关的两个差异表达基因FGF9和ACTN2,分析了其启动子区组蛋白H3K4me2水平的变化,发现当鸡LSD1第65位丝氨酸去磷酸化后,FGF9和ACTN2的启动子区组蛋白H3K4me2水平显著升高（P＜0.05）。证明该磷酸化修饰位点能够上调LSD1的去甲基化活性。（4）FGF9的功能分析。为了分析FGF9的功能,我们构建了鸡FGF9基因的过表达载体并转染鸡的等级卵泡颗粒细胞,结果表明:FGF9有显著促进鸡等级卵泡颗粒细胞增殖的作用（P＜0.05）。综上所述,LSD1第65位丝氨酸的磷酸化在鸡卵泡选择过程中有不同的作用,并且在鸡等级卵泡颗粒细胞中,其磷酸化修饰由CDK5介导产生。将其去磷酸化并对等级颗粒细胞进行转录组测序后,与卵泡选择相关的差异基因的启动子区组蛋白H3K4me2水平升高,证明该磷酸化修饰增强了LSD1的去甲基化活性。这些结果有助于阐明鸡卵泡选择的分子机制,为提高鸡的产蛋性能和分子育种提供理论依据。