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目的:初步探讨硼替佐米联合高三尖杉酯碱对体外微环境中骨髓瘤细胞株U266细胞增殖的抑制作用及其内在机制。方法:1.建立人MM细胞株U266细胞与人骨髓基质细胞HS-5细胞直接粘附共培养体系,以模拟体内造血微环境中的MM细胞;2.采用CCK8法检测U266细胞对药物的敏感性,确定BTZ和HHT作用于共培养后的U266细胞的药物浓度及时间间隔;3.流式细胞术检测MM细胞的周期时相分布;4.Western blot方法检测U266细胞胞浆蛋白IKKα,IKKβ以及IκB激酶的表达水平以及核蛋白P65、P50和P52的改变。结果:1.BTZ单独作用可引起单独悬浮培养的U266细胞增殖抑制:随着用药浓度的增加,BTZ对U266细胞的增殖抑制作用逐渐增强,呈现剂量依赖性。2.HHT单独作用可引起单独悬浮培养的U266细胞增殖抑制:随着用药浓度的增加,HHT对U266细胞的增殖抑制作用逐渐增强,呈现剂量依赖性。3.与人骨髓基质细胞HS-5共培养后,U266细胞对BTZ或HHT单药作用的敏感性显著减低:将人骨髓基质细胞HS-5与U266细胞直接接触共培养以模拟体内微环境,直接接触培养48h后的U266细胞对BTZ或HHT单药作用敏感性显著减低。共培养后的U266细胞对BTZ敏感性完全丧失,15n M浓度时的抑制率由18.26±1.87%下降至-1.67±0.66%同样,HHT对其增殖抑制率也显著下降,20ng/ml浓度时的抑制率由34.54±1.59%下降至-0.53±0.19%。4.BTZ与HHT联合应用对共培养后的U266细胞具有显著的增殖抑制作用:共培养后的U266细胞对15n M BTZ的敏感性从18.26±1.87%下降到-1.67±0.66%,对20ng/ml HHT的抑制率从34.11±1.51%下降到-0.71±0.21%;但两药联合对共培养后的U266细胞的抑制率竟然可以达到60.84±0.75%,具有明显的协同效应。并且,BTZ与HHT两药联合应用于共培养后的U266细胞时,其协同效应的发挥具有两药加入的时间间隔长短的特异性,即在BTZ作用于共培养后的U266细胞后的不同时间段再加入HHT,二者再共同作用48h时,U266细胞的增殖抑制率存在着显著性差异。5.BTZ与HHT联合应用对共培养后的U266细胞周期时相的改变具有显著影响。6.BTZ与HHT联合应用是通过对NF-κB信号途径的调控而实现对共培养后U266细胞的增殖抑制:6.1.共培养后U266细胞的IKB激酶表达下调,导致NF-κB蛋白表达增强。6.2 BTZ和HHT联合应用可抑制NF-κB经典与非经典活化途径。7.BTZ与HHT联合应用对IL-6作用后的U266细胞具有显著的增殖抑制作用:由于IL-6对U266细胞具有显著的促增殖作用,当BTZ或HHT单药作用于IL-6孵育的U266细胞时,其敏感性较未添加IL-6时明显降低。但当BTZ与HHT联合应用时仍能够抵抗IL-6对U266细胞的保护作于,发挥协同作用,抑制U266细胞的增殖。结论:1.BTZ和HHT联合应用对与HS-5细胞共培养后的U266细胞的增殖具有显著抑制作用,二者具有协同效应;该协同效应的发挥具有两药加入的时间间隔长短的特异性。2.BTZ和HHT联合应用对IL-6作用下的U266细胞的增殖具有显著抑制作用,二者具有协同效应。3.BTZ和HHT联合应用对U266细胞增殖的抑制作用与其对NF-κB经典与非经典活化途径的调控相关。