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猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）属于尼多病毒目动脉炎病毒科，它主要引起母猪早产、流产等繁殖障碍，仔猪、育肥猪呼吸困难及育成猪类流感疾病，此外该病毒持续性感染，可引起免疫抑制，成为危害世界养猪业安全的重要病原之一。然而，目前疫苗的使用只能够提供部分保护使机体不再出现临床症状，不能够阻止感染，因此，迫切需要开发一种新型的、能对所有PRRSV病毒株提供保护的抗病毒措施。 RNA干扰是由双链RNA（dsRNA）引发的信使RNA（mRNA）序列特异性消减现象，是一种保守的抗病毒机制，已发现于线虫、植物和哺乳动物中。将21～23nt的小分子干扰RNA双链（small interference RNA，siRNA）或载体DNA转录的发夹RNA（short hairpin RNAs，shRNAs）导入细胞，可以抑制同源的内源或病原mRNA的表达。近几年，RNAi技术已被用于干扰HBV、HCV、流感和其他人类病毒的感染研究，提示RNAi作为一个有效的抗病毒策略，具有很大应用前景，但是目前对于PRRSV是否存在RNA干扰现象，究竟哪些基因哪些序列是合适的靶标，shRNA对PRRSV抑制有哪些特征等等，尚没有这方面的研究。 为了探讨pSUPER质粒能否有效表达发夹小干扰RNA（shRNA），作为RNAi研究的平台，本研究利用RNA干扰技术，以A型流感病毒核衣壳蛋白（NP）基因为靶基因，选用已知的有高效抑制效果的siRNA片段，设计有小发夹结构的两条寡核苷酸序列，经退火成互补双链，再克隆至质粒pSUPER中，经酶切鉴定和测序证实表达质粒构建成功，命名为pSUPER-NP。将该表达质粒转染鸡胚成纤维细胞（CEF），24h后用A型流感病毒感染，病毒感染40h后观察细胞病变，测定病毒血凝效价和TCID50，发现pSUPER-NP能够阻止细胞病变的出现，pSUPER-NP转染孔的血凝价和TCID50均显著下降，表明该表达质粒能抑制流感病毒的复制，pSUPER质粒可以应用于哺乳动物高效的RNAi研究，也为探索流感病毒致病机理和开发基因治疗新途径奠定了基础。 RNAi抑制效果的正确评价，需要合适的检测方法，为了建立灵敏、快速的mRNA检测方法，本研究设计合成了一套引物和TaqMan探针，以扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的核衣壳蛋白基因，通过反应条件的优化，建立了快速定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的实时PCR方法，并用该法检测患病猪的肺脏等样品。结果表明该方法具有较好的特异性和重复性，对PRRSV细胞培养物的检测下限为0.01TCID50，敏感性比常