人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达与初步纯化

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IgM特异性血清学试验在诊断急性病毒感染方面非常有价值,但对HCMV来说,现采用的IgM血清学试验均存在敏感性和特异性较差问题,主要原因是迄今所采用的抗原仍是从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质,由于抗原纯度、特异性方面存在问题,另外由于抗原组成不同及缺乏统一的标准抗原,结果不尽人意.据报道,采用基因工程或化学方法合成的多肽或单一的特异性蛋折的可作为血清学诊断的良好抗原.该文用PCR方法扩增UL57基因的抗原决定簇编码区,目的基因与原核表达载体PGEX-3X分别经双酶切后连接,转化宿主菌Ecoli.JM109,IPTG诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析初步纯化,经SDS-PAGE和Western-Blot对表达产物进行鉴定,结果证明该重组蛋白具良好的抗原性,IgM阳性血清识别率为83.3%.该研究将推动对HCMV急性感染血清学诊断试剂的完善.
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