目的：本研究的目的在于利用现有的大麦BAC单克隆文库（HV_MBb）构建大麦BAC文库三维混合池，并开发一种基于PCR筛选的BAC文库高通量筛选的方法；以便从超过147456个单克隆文库中快速筛选出含有目的基因HvGW2的阳性BAC克隆，并对HvGW2在极端性状材料中的多样性做初步分析。方法：通过数学计算，设计构建可用最少PCR次数筛选的大麦BAC三维混合池模型，利用Q-Pix2系统分别构建了大麦BAC文库三维混合池的板池，行池和列池。同时，设计特异性引物对获得的混合克隆池进行PCR筛选，通过三点定位直接获得单个候选阳性BAC克隆。在此基础上分别统计BAC文库的空载率和所研究目的基因的阳性BAC克隆。最终，根据对目的基因HvGW2所在阳性BAC克隆的部分基因测序结果，结合基因组共线性分析，设计覆盖基因编码区的特异性引物，在籽粒宽度极端性状的大麦种质资源中开展初步关联分析。结果：本研究构建了一个包含160个混合克隆池的大麦BAC三维混合池（板池48个，行池64个，列池48个）。分析获得了该文库中空载体单克隆数目和编号，计算得到混合池空载率为1.52%。从三维池中筛选到三个含有HvGW2基因的阳性BAC克隆，其中，196M02克隆包含完整目的基因。根据该克隆的初步测序结果，分别与禾本科中的水稻和小麦进行基因共线性分析，设计包含编码区的多组基因特异性引物。初步分析发现，其第二外显子上的序列变异与大麦籽粒宽度和千粒重性状高度相关。结论：本研究构建的大麦BAC三维混合池空载率仅为1.52%，共160个混合池，利用特异性引物PCR技术，可以实现快速高效地进行全文库的筛选，满足功能基因发掘的需要。通过构建大麦BAC文库三维混合池及对HvGW2基因的初步研究，为大麦其他功能基因的研究提供了重要的研究平台。