枣（Ziziphus jujuba Mill.）原产于我国,是我国陕北地区最具特色和代表性的经济果树之一。然而枣果成熟期短而集中,又恰逢雨季,导致产区裂果严重;枣果采收后易衰老软化,导致其果肉组织失水皱缩、腐烂,代谢失常并积累大量的乙醇等有害物质,果实的维生素C几乎全部被破坏,这不仅降低了枣果的品质,而且大大缩短了鲜枣市场的货架期。因此,培育具有延熟、耐贮特性的枣品种,对于促进鲜枣产业的发展具有重要的意义。随着人们对乙烯生物合成途径中相关酶类的分子机理研究不断深入,应用基因工程技术调控乙烯合成过程中ACC氧化酶基因的表达,从而使得降低乙烯的产生提高枣果的保鲜耐贮成为可能。本试验以狗头枣ACOⅠ基因为靶标,利用RNAi技术对木枣内源ACOⅠ基因进行干扰,以期降低乙烯合成中ACO基因的表达,进而为获得保鲜耐贮的枣品种。经过研究,已取得了如下结果:1.从狗头枣ACOⅠ基因cDNA片段ORF中选择566⁸59、1002¹267之间的两个基因片段作为靶标,采用一步PCR法将靶标基因片段进行融合,得到了大小为558 bp的融合基因ACOⅠ_3-4。对融合基因序列同源性进行blast分析比较,与枣的ACO1基因同源性为96.53%。2.构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有正反向ACOⅠ_3-4片段RNAi植物表达载体pARTACOⅠ_3-4,并将其导入根癌农杆菌LBA4404。3.确定了木枣叶片愈伤组织再生的Kan选择压浓度为20 mg/L,木枣组培苗的Kan选择压浓度为30 mg/L;农杆菌脱菌剂Carb的选择压浓度为400 mg/L。4.建立了木枣叶片的高效遗传转化体系:将木枣叶片剪成大小约为0.5 cm²左右的小块,预培养1 d后,在OD600为0.6⁰.8的工程农杆菌菌液中侵染10 min,共培养3 d后,经过20 d左右的暗培养其抗性愈伤组织诱导率为19.00%。5.将Kan筛选后初步获得的抗性植株经PCR检测有16株呈阳性,初步表明ACOⅠ基因干扰片段成功整合到木枣基因组中。