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背景慢加急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure,ACLF）是一组以黄疸、凝血功能障碍、肝肾综合征、肝性脑病、腹水等为主要表现的复杂的临床综合征,其短期病死率可达50%-90%。在我国,又以乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的占多数。由于HBV-ACLF起病急、进展迅速、治疗有限,因此早期评估病情、判断预后对后期临床工作具有指导作用。HBV-ACLF时,机体内免疫紊乱,炎症反应及代偿性抗炎反应并存,免疫炎症在疾病发生发展中起着至关重要的作用。人工肝支持系统（artificial liver support system,ALSS）是一种有效的治疗手段,可改善临床症状,降低病死率。探究外周血免疫细胞的转录组学改变特征可以帮助我们研究HBV-ACLF及李氏人工肝系统（Li’artificial liver system,Li-ALS）治疗的特征性免疫改变,筛选具有预后价值的标志物,对疾病预后评估有重要意义。目的1.描述HBV-ACLF患者的临床特征及疾病转归,寻找短期不良预后的独立危险因素,评价多个预后模型的预测作用。2.探究HBV-ACLF患者外周血免疫细胞中预后相关的miRNA-mRNA调控网络,筛选和寻找影响疾病重症化及不良预后的关键通路及生物标志物。3.探究Li-ALS治疗对HBV-ACLF患者外周血免疫细胞的基因表达谱改变特征,筛选治疗相关的关键基因。方法1.回顾性收集我院自2017年1月至2020年11月间住院治疗的符合中国重型乙型肝炎研究小组（the Chinese Group on the Study of Severe Hepatitis B,COSSH）标准的HBV-ACLF患者的临床资料和预后信息,分析疾病特征及临床转归,通过COX回归分析探讨可能导致HBV-ACLF不良预后的危险因素,绘制受试者工作曲线（receiver operating curve,ROC）并评价在COSSH标准下的HBVACLF患者中各个预后评分模型对短期预后的预测作用。2.运用转录组学探究发现队列中HBV-ACLF患者外周血免疫细胞中预后相关miRNA和mRNA表达谱变化,利用生物信息学分析构建miRNA-mRNA共调控网络。在验证队列中行实时定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR）检测和ROC曲线分析,筛选预后相关生物标志物,荧光素酶报告实验确定相关miRNA-mRNA关系对的靶向作用。同时,运用酶联免疫法检测血浆细胞因子,探究与预后关系。3.运用转录组学探究Li-ALS治疗对HBV-ACLF患者（不同预后）外周血免疫细胞的基因表达谱变化,分析差异基因富集的生物学功能及相关通路,利用STRING网站和Cytoscape软件构建蛋白质互作（protein protein interaction,PPI）网络,根据Dergee值寻找并确定枢纽基因。结果1.回顾性研究共纳入323例HBV-ACLF患者进行临床特征及预后分析,结果显示年龄、肝硬化、国际标准化比值（international normalized ratio,INR）是患者28天不良预后的独立危险因素,年龄、肝硬化、肌酐、INR是90天不良预后的独立危险因素。COSSH-ACLFs、慢性肝功能衰竭联盟慢加急性肝功能衰竭评分（Chronic Liver Failure Consortium acute on chronic liver failure score,CLIF-C ACLFs）、慢性肝功能衰竭联盟器官功能衰竭评分（Chronic Liver Failure Consortium organ failure assessment score,CLIF-COFs）、终末期肝病模型（model for end-stage liver disease,MELD）评分的预测28及90天病死率价值的au ROC（95%CI）分别为0.797（0.746-0.842）、0.762（0.708-0.809）、0.794（0.742-0.839）、0.735（0.680-0.785）及0.782（0.730-0.829）、0.748（0.694-0.797）、0.727（0.671-0.777）、0.706（0.650-0.758）。2.发现队列入组8例28天生存和8例28天死亡的HBV-ACLF患者,通过miRNA和mRNA表达谱筛选出差异表达的39个miRNA和1032个mRNA,由此构建了一个由38个miRNA和313个mRNA组成的共调控网络,该网络主要富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、Th17细胞分化等免疫炎症相关通路。验证队列入组78例HBV-ACLF患者,q RT-PCR结果和ROC曲线分析显示mi R-6861-3p（au ROC=0.729）、mi R-6840-3p（au ROC=0.680）在不同预后组间具有显著差异,可作为短期预后的标志物。mi R-6840-3p和JADE2之间存在直接靶向作用。同时IL-6、IL-8及PDGF-BB等细胞因子水平在28天死亡组显著高于生存组,IL-6也在90天不同预后组间分布存在显著差异。3.我们共选择10例（5例28天生存+5例28天死亡）首次在我院行Li-ALS治疗的HBV-ACLF入组,通过基因表达谱芯片筛选出601个差异基因,其中包含443个上调差异基因和158个下调差异基因,差异基因主要富集在炎症及感染相关的信号通路和血小板活动。对不同预后分组的差异基因取交集后构建PPI网络,筛选出10个枢纽基因,包含8个上调基因PF4、SELP、ITGA2B、EGF、PPBP、GNG11、P2RY12和ADORA3,2个下调基因CXCL10和CX3CR1,其中半数参与细胞因子-细胞因子受体相互作用通路过程。结论在基于COSSH标准的HBV-ACLF患者中,年龄、肝硬化、INR是患者28天及90天不良预后的独立危险因素,COSSH-ACLFs模型具有良好的短期预后预测价值。HBV-ACLF患者外周血免疫细胞中预后相关的miRNA-mRNA共调控网络提示免疫紊乱影响患者预后,mi R-6840-3p-JADE2可能促进ACLF的进展,从而导致预后不良,同时mi R-6840-3p和mi R-6861-3p可作为短期不良预后的标志物。最后,Li-ALS治疗不仅仅是患者血液物质交换,也继发改变了患者的部分免疫状态,其中,细胞因子-细胞因子受体相互作用可能了发挥重要作用,从而影响治疗效果。