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炎症反应是许多疾病和创伤后共同的病理过程。过去认为炎症只是许多疾病的伴随症状,在疾病的进展中发挥清除组织碎片和参与组织修复的过程。近年来的研究证实,在缺血再灌流和创伤中急性期的炎症反应加重了组织水肿,介导了继发性的组织损伤。脑缺血再灌流后,兴奋性氨基酸的过度释放、自由基的产生、脂质过氧化和炎症反应都引起了继发性脑损伤。继发性脑损伤的机制相互加强,抑制一种途径可能会产生广泛的影响。在炎症反应中,内皮粘附分子介导了白细胞的粘附和渗出,COX-2也促进了炎症的进展。 本实验通过线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),观察再灌流后不同时间白细胞髓过氧化物酶的变化,ICAM-1、E-selectin和COX-2在脑中的诱导及表达部位、时间的变化,初步探讨COX-2和粘附分子在中枢神经系统再灌流后炎症损伤中的作用。 将雄性Wister大鼠分假手术组,尼龙线插入长度短于15mm;缺血再灌流组,用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO)。缺血2h后再灌流,又分为再灌流4h组,22h组,46h组,分别在不同的时间断头处死。每组6只动物。 用半定量RT-PCR方法和Western印迹分别检测ICAM-1和E-selectin mRNA和蛋白的表达以及COX-2蛋白的表达。MPO检测试剂盒检测MPO活性。免疫组化观察ICAM-1、E-selectin表达的部位。 通过实验得出以下结果: 1.利用线栓法制成MCAO模型,梗死部位主要局限于纹体,外侧皮层。 2.再灌流4小时后,MPO活性增加,一直持续到再灌流后46小时。 3.ICAM-1mRNA于缺血再灌流后4小时开始在皮层和纹体区表达都增加,皮层一直持续到再灌流后46小时;但在纹体区,再灌流后46小时与缺血前无明显差别。通过Western印迹证实了ICAM一1的蛋白表达与mRNA的表达相一致。4.E一selectin mRNA在正常脑组织有少量表达,再灌流后表达增加。再灌流4小时皮层表达较22小时和46小时高,在纹体区4小时、22小时和46小时没有差别。在皮层E一selectin蛋白表达与mRNA的表达一致,但在纹体区4小时蛋白表达也较22小时和46小时高。5.免疫组化显示在假手术大鼠的脑中存在少量E一selectin和ICAM一1阳性血管存在,在缺血再灌流后,在皮层和纹体的缺血边缘区都出现大量免疫阳性微血管。6.再灌流后4小时COX一2蛋白表达增加,一直持续到再灌流后46小时,在皮层COX一2阳性细胞主要为神经元,在纹体区神经元呈弱阳性染色,出现了免疫阳性的胶质细胞和血管内皮。7.ICAM一1和COx一2在表达的时间和部位上有高度的一致性。经相关分析显示,再灌流后不同时间皮层COX一2与ICAM一1表达量呈正相关,相关系数分别为0.973,P(0.05;纹体区COX--2与E一seleetin表达量呈正相关,相关系数为0.958,P(0.05。结论:大鼠脑再灌流后缺血半球中性粒细胞浸润增加,持续到再灌流后46小时,提示炎症反应参与了缺血周边区的再灌流后继发性损伤。再灌流早期皮层和纹体内皮粘附分子E一selectin、ICAM一1和COX一2的表达增加,有表达的时间和部位上的一致性;同时也与中性粒细胞的浸润程度一致。提示了COX一2和内皮粘附分子的表达都在再灌流后中性粒细胞的浸润中发挥重要的作用,而且 COX一2的表达可能通过促进粘附分子的表达发挥作用。