目的：　　 近期的研究显示PAD14抗体与类风湿关节炎关系密切，在类风湿关节炎的发生发展中起重要作用，作为类风湿关节炎特异性标志物可用于类风湿性关节炎的辅助诊断。　　 本研究目的：　　 1.研制一种PADI4抗体定性检测试剂盒，为类风湿关节炎的临床辅助诊断提供一种新方法；　　 2.利用基因工程技术制备PADI4重组抗原，为下一步以重组抗原制备该试剂盒做准备。　　 方法：　　 用PADI4多肽片段作为包被抗原制备PADI4抗体检测ELISA试剂盒，按二类诊断试剂的注册要求，对其生产工艺及反应体系进行优化，对其质量体系进行系统考核并制定质量标准。对181份临床确诊RA患者血清和353份正常人血清进行初步验证。使用PCR法检测质粒中的PADI4基因，并将质粒通过热激法转染至工程菌BL21(DE3)中，使用IPTG诱导目的融合蛋白Nus·PADI4的表达。其表达产物使用SDS-PAGE和Westem Blot进行检测和验证。　　 结果：　　 所制备的PADI4抗体定性检测试剂盒总体符合率为85.3％，灵敏度为46％，特异性为92.2％：批内变异系数阴性对照品为4.26％-4.96％，阳性对照品为4.94％-5.57％，批间变异系数阴性对照品为6.78％,阳性对照品为7.89％；在4℃下保存12个月和37℃下保存7天稳定性良好。181份RA患者血清中阳性检出率为45.3％,353份正常人血清的阳性检出率为7.7％，两者具有统计学意义，P＜0.01。PCR结果表明质粒中存在PADI4的cDNA，经测序显示该基因插入质粒的位置和方向均正确。经SDS-PAGE及Westem Blot检测，转染质粒Nus-PADI4/PET-43 aPADI4的工程菌BL21(DE3)经IPTG诱导后表达融合蛋白Nus-PADI4，但其表达量不理想。　　 结论：　　 1.所研制的PADI4抗体检测ELISA试剂盒可用于类风湿关节炎的临床辅助诊断。　　 2.BL21(DE3)1程菌成功表达出了PADI4融合蛋白，但其表达量待进一步提高。