当归-川芎药对不同提取物的抗炎作用及其机制研究

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ChengpCN
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目的:临床上当归和川芎配伍常用于养血活血、调经止痛,本课题研究当归和川芎配伍后的药效物质和抗炎作用,并探讨其作用机制,为中药复方配伍的现代药理研究提供实验依据。方法:本研究将当归和川芎以6种配比和7种溶剂提取,42组提取液通过HPLC外标一点法检测阿魏酸和咖啡酸的含量变化;体外通过DPPH和ABTS法评价抗氧化活性,通过H2O2诱导HUVEC细胞氧化损伤模型评价细胞水平的抗氧化活性;体内通过小鼠耳肿胀模型以及大鼠足肿胀模型研究提取物的抗氧化和抗炎活性,检测足肿胀大鼠血清以及炎症组织中的MDA、SOD、NO、COX-2、PGE2、TNF-α等指标的水平。结果:1.本实验筛选出当归和川芎提取物WA-2-1(归芎配比2:1、先水后醇提取),体外对DPPH·和ABTS+·自由基有良好的清除作用,体外对HUVEC细胞氧化损伤有显著保护作用,以及大鼠体内具有降低氧化损伤作用,在小鼠耳肿胀模型上的肿胀抑制率最高,在大鼠足肿胀模型上也有显著的肿胀抑制作用。2.当归和川芎的共有成分阿魏酸和咖啡酸,在归芎不同配比组合时,以95%乙醇提取其含量均为最低,以水提取时咖啡酸的含量最高,50%乙醇提取和先水后醇提取时阿魏酸含量最高,而先水后醇提取有利于药效物质的协同溶出。先水后醇提取时提取物WA-2-1的抗炎作用最好,但其阿魏酸和咖啡酸的含量并不是最高。3.当归和川芎在不同配比组合时,95%乙醇提取对DPPH和ABTS自由基的清除能力都很弱;先醇后水或先水后醇提取对DPPH和ABTS自由基的清除能力都较强。归芎提取物对HUVEC细胞的毒性很小,在0.2 mg/m L浓度时HUVEC细胞的存活率在90%以上,在H2O2诱导HUVEC细胞氧化损伤模型上,先水后醇提取物WA-2-1对氧化损伤有显著保护作用,细胞存活率在88%以上。在体内大鼠足肿胀炎症模型上,提取物WA-2-1可降低大鼠血清中NO水平,降低MDA水平,提高SOD的活力。4.在二甲苯致小鼠耳肿胀模型上,提取物WA-2-1和AW-2-1对耳肿胀的抑制效果显著,抑制率分别为34.3%和31.4%,而WA-0-1的抗炎效果最差,抑制率为10.5%。在角叉菜胶致大鼠足肿胀模型上,对提取物WA-2-1进一步进行抗氧化和抗炎作用研究,在给药剂量2.29 g/kg时对足肿胀度的抑制效果最好,并在1 h时达到最大抑制率(41.176%);提取物WA-2-1有效降低大鼠血清和炎症足组织中NO水平,提高SOD活力,降低MDA的水平,降低COX-2、PGE2和TNF-α的水平。炎症足组织的病理结果表明,WA-2-1能够有效减少炎症病灶的炎性细胞的产生。结论:本实验筛选出当归和川芎提取物WA-2-1(归芎配比2:1、先水后醇提取),在体外和体内具有良好的抗氧化作用,在体内也具有良好的抗炎作用。归芎药对的抗炎机制主要有两方面:一方面,提取物WA-2-1具有较好的抗氧化作用,可降低MDA水平,提高SOD活力,减轻炎症过程中的氧化应激;另一方面,提取物WA-2-1可降低炎症因子NO、PGE2、TNF-α和COX-2的水平,可减缓炎症进程。
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