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目的:通过在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中对β-葡聚糖酶进行表达,找到表达酶活高的菌株,以及比较在毕赤酵母和解脂耶氏酵母两种系统中表达的不同。
方法:本实验通过用基因合成的方法合成来源于Bacillus licheniformis和Fibrobacter succinogenes两种来源的毕赤酵母密码子偏爱性的β-葡聚糖酶基因,分别将两种p.葡聚糖酶基因克隆到毕赤酵母载体pHBM905A和解脂耶氏酵母载体pINA1296上,通过对两种载体的鉴定得到重组毕赤酵母载体和解脂耶氏酵母载体。将重组质粒分别转入毕赤酵母菌GS115和解脂耶氏酵母菌Polg,通过功能筛选找到酶活高的毕赤酵母菌株和解脂耶氏酵母菌株。对重组毕赤酵母和重组解脂耶氏酵母分别进行摇瓶培养,经SDS-PAGE来检测β-葡聚糖酶在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中的表达情况。用酶活检测来确定β-葡聚糖酶在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中酶活和诱导时间的关系,分别用三种底物来测定β-葡聚糖酶在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中的酶活,比较β-葡聚糖酶在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中酶活性的高低,以及不同底物下β-葡聚糖酶酶活的高低。
结果:两种来源的β-葡聚糖酶基因在毕赤酵母和解脂耶氏酵母中均得到了表达,测定酶活结果表明在毕赤酵母中诱导时间三天时酶活达到最高,而在解脂耶氏酵母中则需要四天酶活达到最高。β-葡聚糖酶在解脂耶氏酵母中表达酶活要略高于在毕赤酵母中表达的酶活。