【摘 要】
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目的:研究二甲双胍对He La细胞肌动蛋白骨架重组的影响,及其影响增殖、迁移和侵袭的过程中coflin的变化,并探讨相关机制。方法:应用细胞增殖及毒性（Cell Counting Kit-8,CCK-8）试剂盒检测0、5、10、20 mmol/L二甲双胍分别处理Hela细胞12h、24h和48h后细胞活力的变化;使用二甲双胍处理He La细胞并进行划痕实验、transwell迁移和侵袭、细胞克隆形
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目的:研究二甲双胍对He La细胞肌动蛋白骨架重组的影响,及其影响增殖、迁移和侵袭的过程中coflin的变化,并探讨相关机制。方法:应用细胞增殖及毒性（Cell Counting Kit-8,CCK-8）试剂盒检测0、5、10、20 mmol/L二甲双胍分别处理Hela细胞12h、24h和48h后细胞活力的变化;使用二甲双胍处理He La细胞并进行划痕实验、transwell迁移和侵袭、细胞克隆形成实验,检测二甲双胍对He La细胞增殖、迁移和侵袭的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色Hela细胞的丝状肌动蛋白（Filamentous actin,F-actin）,观测荧光显微镜下F-actin的荧光强度变化;检测二甲双胍处理He La细胞各时间点（3h、6h、12h和24h）F-actin荧光强度变化;激光共聚焦显微镜观察二甲双胍处理He La细胞后肌动蛋白骨架结构应力纤维（Stress fiber）的变化;检测cofilin及其上游LIMK1、ROCK1和Rho A的基因和蛋白表达变化。结果CCK-8细胞活力检测显示:随着二甲双胍浓度和处理时间的增加,He La细胞活力下降（P＜0.05）。划痕实验结果显示,二甲双胍组12h、24h和48h的迁移率都小于NC组（P＞0.05;P＜0.01;P＜0.05）。Transwell迁移和侵袭实验显示,二甲双胍组迁移或侵袭至小室背面的细胞数少于NC组（P＜0.05;P＜0.01）。细胞克隆形成实验显示,相较于二甲双胍处理组,NC组拥有更多且明显的结晶紫染色成蓝紫色的细胞团（P＜0.01）。荧光显微镜下,5 mmol/L二甲双胍处理He La细胞24h后F-actin荧光强度增加;在5 mmol/L二甲双胍处理He La细胞3h、6h、12h和24h的四个时间点,He La细胞F-actin荧光强度均高于NC组（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05和P＜0.01）。激光共聚焦显微镜显示:肌动蛋白骨架结构应力纤维荧光强度增加、应力纤维束之间聚拢变粗、分布在细胞边缘且出现新的极化方向;细胞的最长径减短（P＜0.05）,极性降低。提示:二甲双胍引起He La细胞肌动蛋白骨架结构和分布的改变。RT-PCR结果显示:Rho A、LIMK1和Cofilin1的m RNA表达增加（P＜0.01）,ROCK1不具有统计学差异。蛋白免疫印迹显示:总的AMPK蛋白表达不变,p-AMPK蛋白表达增加（P＜0.01）,二甲双胍激活AMPK;总cofilin蛋白表达不变,p-cofilin增加（P＜0.05）。提示:二甲双胍抑制cofilin蛋白的活性。Rho A、ROCK1和LIMK1蛋白表达增加（P＜0.05、P＜0.05和P＜0.01）。结论:1、二甲双胍可抑制He La细胞的增殖、迁移和侵袭。2、二甲双胍影响He La细胞肌动蛋白骨架的重组,并引起肌动蛋白骨架结构应力纤维的变化。3、cofilin蛋白磷酸化增加可影响He La细胞肌动蛋白骨架的重组,进而抑制He La细胞的迁移、侵袭和增殖。
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