【摘 要】
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[目的]研究Corilagin对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7增殖和泡沫化的影响,测定CD40、CD40L、肿瘤坏死因子受体相关因子-1（tumor necrosis factor receptor-associated factor-1,TRAF-1）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、诱导型一氧化氮合酶（inducib
【基金项目】
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国家自然科学基金（81260493）； 云南省基础研究计划重点项目:灯盏乙素治疗急性冠脉综合征及对CD40-CD40L信号通路调控作用研究（202001AS070035）；
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[目的]研究Corilagin对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7增殖和泡沫化的影响,测定CD40、CD40L、肿瘤坏死因子受体相关因子-1（tumor necrosis factor receptor-associated factor-1,TRAF-1）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）)、γ-干扰素（γ-interferon,IFN-y）的 mRNA及蛋白表达的水平,探索 Corilagin对CD40-CD40L信号通路的调控作用机制。[方法]1.体外培养小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7,CCK-8法测定不同浓度LPS（0.4μ/mL、0.6μg/mL、0.8μg/mL、1.0μg/mL、1.2μg/mL）作用不同时间（12h、24h、48h）对RAW264.7细胞活性的影响,确定LPS最佳诱导浓度和时间。2.实验分组:正常对照组、LPS损伤模型组、阳性对照组（辛伐他汀10μmol/L）、Corilagin 不同剂量组（6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50μmol/L、1 00μmol/L）,DRI-C21045（CD40-CD40L 信号通路抑制剂）组,DRI-C21045+Corilagin100μmol/L 组。3.CCK-8 法测定 Corilagin 不同剂量（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞增殖的影响,并绘制剂量反应曲线,得到IC50。4.油红O法和胆固醇试剂盒测定Corilagin不同剂量（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）对 LPS 诱导损伤的 RAW264.7 细胞泡沫化的影响。5.实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、iNOS 和 IFN-γ的mRNA表达。6.Western blot 检测 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、iNOS 和IFN-γ的蛋白表达。7.免疫荧光方法检测RAW264.7细胞中CD40、CD40L和TRAF-1的蛋白表达。[结果]1.1.0μg/mL的LPS作用24h对RAW264.7细胞的促增殖作用最明显,1.0μg/mL的LPS为最适诱导浓度,24h为最适诱导时间。2.Corilagin对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞增殖有抑制作用,其IC50为41.25μmol/L。3.Corilagin对LPS诱导损伤的RAW264.7细胞泡沫化有抑制作用。4.RT-qPCR结果显示:与正常对照组比较,LPS损伤模型组CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的 mRNA 表达增强,iNOS 的 mRNA 表达减弱;与 LPS损伤模型组比较,阳性对照组、Corilagin 25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的 mRNA 表达减弱,iNOS 的 mRNA 表达增强,而 Corilagin 6.25μmol/L、12.5μmol/L 组与模型组比较无明显差异（P>0.05）。5.Western blot结果显示:与正常对照组比较,LPS损伤模型组CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、IFN-γ的蛋白表达增强,iNOS的蛋白表达减弱;与LPS损伤模型组比较,阳性对照组、Corilagin 25μmol/L 组、50μmol/L 组、100μmol/L组 RAW264.7 细胞中 CD40、CD40、TRAF-1、IL-6、IFN-γ 的蛋白表达减弱,iNOS的蛋白表达增强,而Corilagin 6.25μmol/L、12.5μmol/L组与模型组比较无明显差异（P>0.05）。6.免疫荧光结果显示:与正常对照组比较,模型组CD40、CD40L、TRAF-1的表达增强;与模型组比较,阳性对照组、Corilagin100μmol/L组RAW264.7细胞中CD40、CD40L、TRAF-1的表达减弱。[结论]1.Corilagin能明显抑制LPS诱导损伤的RAW264.7细胞的异常增殖和泡沫化。2.Corilagin 能下调 LPS 诱导损伤的 RAW264.7 细胞 CD40、CD40L、TRAF-1、IL-6、IFN-γ的mRNA和蛋白表达水平,上调iNOS的mRNA和蛋白表达水平。3.Corilagin抑制LPS诱导损伤RAW264.7细胞增殖和泡沫化的作用与对CD40-CD40L信号通路的调控作用密切相关。
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