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第一部分放射致鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤自噬过程与PARP-1关系的探讨【目的】探讨放射是否可致鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤发生自噬,及PARP-1与放射致自噬的关系。【方法】1.将CNE-2细胞接种于裸鼠皮下,成瘤后分为2组:0Gy组及10Gy组,10Gy组接受10Gy照射剂量,采用western blot检测两组裸鼠移植瘤PARP-1、LC3II及P62的表达,明确放射是否可致裸鼠移植瘤发生自噬。2.将PARP-1基因沉默的CNE-2接种于裸鼠,分为CNE-2组、NC组、PARP-1-shRNA组,成瘤后采用RT-qPCR及western blot检测PARP-1的表达,验证PARP-1的沉默效果。3.CNE-2组、NC组、PARP-1-shRNA组裸鼠均接受10Gy照射剂量,采用western blot检测PARP-1、LC3II及P62的表达,明确PARP-1与自噬关系。【结果】1.与0Gy组比较,10Gy组PARP-1、LC3II表达增多,P62表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与CNE-2组及NC组比较,PARP-1-shRNA组PARP-1的mRNA、蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。3.经10Gy照射后,与CNE-2组及NC组比较,PARP-1-shRNA组PARP-1、LC3II表达减少,P62表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】放射可致鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤发生自噬,且PARP-1是自噬的上游调控点。第二部分PARP-1通过AMPK/mTOR通路介导鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤放射后自噬的发生【目的】探讨PARP-1是否通过AMPK/mTOR通路调节鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤发生自噬。【方法】将裸鼠分为0Gy组、10Gy组、AICAR+10Gy组、Compound C+10Gy组、PARP-1-sh RNA+10Gy组。后4组均接受10Gy照射剂量,其中AICAR+10Gy组、Compound C+10Gy组分别给予腹腔注射AICAR及Compound C,PARP-1-sh RNA+10Gy组接种PARP-1沉默的CNE-2细胞。采用western blot检测PARP-1、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、p-P70S6K、P70S6K、LC3II及P62的表达变化。【结果】1.与0Gy组比较,10Gy组PARP-1、p-AMPK/AMPK、LC3II表达增加,p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K及P62表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与10Gy组比较,AICAR+10Gy组p-AMPK/AMPK、LC3II表达增加,p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K及P62表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。PARP-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。3.与0Gy组比较,Compound C+10Gy组、PARP-1-sh RNA+10Gy组p-AMPK/AMPK、LC3II、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K及P62表达差异无统计学意义(P>0.05);Compound C+10Gy组PARP-1表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);PARP-1-sh RNA+10Gy组PARP-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】放射后,PARP-1通过AMPK/mTOR通路调节鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤发生自噬。第三部分干扰PARP-1-AMPK/mTOR通路对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响【目的】探讨干扰PARP-1-AMPK/mTOR信号通路对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。【方法】将裸鼠分为0Gy组、PARP-1-sh RNA组、Compound C组、10Gy组、Compound C+10Gy组、PARP-1-sh RNA+10Gy组;后三组接受10Gy照射剂量;PARP-1-sh RNA组、PARP-1-sh RNA+10Gy组接种PARP-1沉默的CNE-2细胞;Compound C组、Compound C+10Gy组给予腹腔注射Compound C。测定移植瘤体增长曲线、瘤体重量,采用免疫组化及western blot检测PARP-1及Bax蛋白的表达。【结果】1.与0Gy组比较,10Gy组、PARP-1-sh RNA组、Compound C组的瘤体体积增长速度较慢,重量较轻,差异有统计学意义(P<0.05);与10Gy组、PARP-1-sh RNA组、Compound C组比较,PARP-1-sh RNA+10Gy组、Compound C+10Gy组的瘤体体积增长速度较慢、重量较轻,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与0Gy组比较,10Gy组、Compound C+10Gy组的PARP-1表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);10Gy组、PARP-1-sh RNA组、Compound C组的Bax蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与10Gy组比较,PARP-1-sh RNA+10Gy组、Compound C+10Gy组的Bax表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】干扰PARP-1-AMPK/mTOR通路后,能提高鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤的放射敏感性。