芽孢杆菌(Bacillus)是一类产芽孢的革兰氏阳性菌,因芽孢杆菌具有抗逆性强、抗菌谱广及生长代谢速度快等优点,被广泛应用于植物病害的防治研究中。芽孢杆菌可以产生多种抑菌物质,与传统的抗生素不同,其主要是通过与细胞膜发生作用,会导致膜内物质泄露,甚至会使细胞溶解直接致使细胞死亡。本研究首先采用平板筛选法以黄曲霉(Aspergillus flavus)、茄链格孢菌(Alternaria solani)作为指示菌,从天津市滨海新区的盐碱地土壤中筛选出来一株对茄链格孢菌(Alternaria solani)有拮抗作用的菌株,抑菌带宽度为5.45mm。随后建立了一个菌种发酵液库,目前已有一万余种样品,采用高通量96孔板法以蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus、黄瓜角斑病菌Pseudomonas syringae pv.lachrymans为指示菌,筛选出一株对蜡样芽孢杆菌有抑制作用的菌株,抑菌率为91.00%,平板打孔扩散法抑菌圈直径为11.76mm。通过菌落形态观察,显微结构观察,生理生化试验以及16S r DNA鉴定,分别鉴定这两株菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis与侧孢短芽孢杆菌Brevibacillus laterosporus,并且命名为WN015与WN11079。采用单因素试验以其抑菌效力为响应值对菌株WN015培养条件进行优化,菌株WN015的抑菌带宽度由5.45mm上升到6.7825mm。在此基础上,使用响应面法对其培养条件进行进一步优化,首先对菌株WN015进行Plackket Burman试验,结果表明培养基初始p H值、发酵温度以及接种量对菌株WN015的抑菌效力影响显著,根据PB试验与最陡爬坡试验结果,设计中心组合(CCD)试验,结果表明当培养基初始p H值为7.55,发酵温度为33.17℃,接种量为4.41%时,菌株WN015的抑菌效力最强,抑菌带宽度12.68mm,是优化前的2.33倍。粗提物提取试验结果表明当硫酸铵饱和度为80%时抑菌物质析出效果最好,其发酵上清液温度、p H以及蛋白酶的稳定性测定试验结果表明,发酵上清液经121℃高压灭菌后,其抑菌活性下降约42.35%,对弱酸弱碱环境不敏感,强酸强碱环境敏感,经蛋白酶K处理后的发酵上清液,抑菌活性下降了约31.3%。以同样的方法对WN11079的抑菌效力进行优化,PB试验结果表明培养基初始p H值、摇床转速与发酵温度对WN11079的抑菌效力影响显著,中心组合(CCD)试验结果表明,当初始p H值为7.75,摇床转速212.35rpm,发酵温度为34.41℃时,其抑菌效力最强,抑菌圈直径为24.48mm,是优化前的2.08倍。粗提物提取试验结果表明当硫酸铵饱和度为40%时抑菌物质析出效果最好,其发酵上清液温度、p H以及蛋白酶的稳定性测定试验结果表明,发酵上清液对温度,酸性环境,蛋白酶不敏感,但对碱性环境敏感。本文初步探究了贝莱斯芽孢杆菌WN015与侧孢短芽孢杆菌WN11079抗菌活性,为这两种拮抗菌株中抗菌物质的后续研究以及在植物病害防治工作中的应用提供了夯实的理论基础。