乳酸菌细菌素LLC518的分离纯化及制备

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:shiyilang7879
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细菌素是一些细菌产生的抑菌物质,具有作为食品防腐剂以提高食品安全性的潜在应用价值。本文对Lacticin LLC518的吸附特性、作用方式、毒理学特性、分离纯化方法及其喷雾干燥条件进行了研究,为Lacticin LLC518的工业化生产与实际应用提供理论依据。本研究首先对Lacticin LLC518吸附于其产生菌乳酸乳球菌LLC518的规律作了探讨。Lacticin LLC518在pH6.0时对乳酸乳球菌LLC518空载细胞的吸附率达到100%,pH2.0时吸附率为0。其次采用pH吸附、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、RP-HPLC三步法对Lacticin LLC518进行分离纯化。Lacticin LLC518的得率为3.19%,比活为1526.95AU/mg,纯化了143.11倍。另外,还采用硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析、RP-HPLC三步法对Lacticin LLC518进行分离纯化。Lacticin LLC518的得率为17.97%,比活为411.52AU/mg,纯化了38.57倍。在Lacticin LLC518纯化的基础上对其进行LC-MS与MALDI-TOF-TOF-MS质谱检测,获得LacticinLLC518的分子量为3347Da,与电泳检测相符合。然后通过单因素实验、PB设计、BB设计与响应面优化,获得了LacticinLLC518的最佳喷雾干燥条件为:辅料比15.29%、进风温度150.24°C、蠕动泵流速1194.6mL/h。在此条件下,Lacticin LLC518的总活力达到了74112.13AU,是原始水平的2.01倍。最后还对Lacticin LLC518的作用方式与毒理学特性作了分析。在4°C时,Lacticin LLC518对于乳杆菌LPX801与单核增生李斯特菌有较强的杀菌作用;37°C时,Lacticin LLC518对于乳杆菌LPX801的作用方式为杀菌,对于单核增生李斯特菌的作用方式为抑菌。小鼠的毒理学实验表明, Lacticin LLC518的最大耐受量为1.44g/kg。
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