肿瘤干细胞标志物CD44变异体在宫颈癌中的表达分析

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研究背景在世界范围内,宫颈癌是第2位常见的妇科肿瘤[1]。86%宫颈癌发生于低收入和中等收入国家,并且在这些国家宫颈癌死亡率占全球宫颈癌死亡率88%[2]。人乳头状病毒(HPV)在子宫颈鳞状上皮与柱状上皮(转化区)交界处的的整合与持续感染是导致宫颈癌发生的重要因素。转化区很可能成为可以繁殖的恶性肿瘤干细胞(CSCs)。通过肿瘤标志物识别并靶向肿瘤干细胞能早期发现并治疗宫颈癌[3]。肿瘤干细胞(CSCs)是指一类能够无限增殖、自我更新、多向分化,产生不同表型的肿瘤细胞,它是由异质性的细胞群体组成,肿瘤组织中只有很小一部分细胞具有干细胞特性。肿瘤干细胞在肿瘤的转移、复发及耐药起重要作用。目前,CSCs标记物和功能分析被用于在体外和体内纯化、鉴定和治疗CSCs。CD44是一个多结构、多功能的跨膜糖蛋白,是细胞黏附分子家族(CAM)的重要成员,最初被认为是透明质酸(HA)的受体,主要负责细胞与细胞之间、细胞与基质之间的黏附,它也是很多肿瘤干细胞的一个重要标志物[4],然而CD44分子变异体很多但宫颈癌中主要表达亚型以及是否为宫颈癌干细胞标志物仍饱受争议,本文主要在宫颈癌细胞系、宫颈癌临床标本中检测CD44分子变异体的表达并进行分析。目的研究干细胞标志物CD44分子在宫颈癌中表达的变异体并进行分析方法(1)通过qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、HeLa、ME-180细胞系CD44各种变异体的转录水平;(2)凝胶电泳进一步验证CD44在子宫颈癌细胞株中的表达亚型及水平;Western blot法检测子宫颈癌细胞株中的CD44v6蛋白水平;(3)免疫组化检测30例宫颈癌组织中CD44v6蛋白的表达水平及部位,结合临床病理特征及预后进行分析;(4)在宫颈鳞癌中应用kaplan meier-plotter RNAseq数据库对其它常见肿瘤干细胞标志物ABCG2、SOX2、KLF4、Lrig、BMI1、NANOG、UTF1进行预后分析。结果(1)SiHa、HeLa细胞系主要表达CD44s、CD44v6型变异体,ME-180细胞系主要表达CD44v型变异体,以CD44v6为主;(2)宫颈癌组织中CD44v6蛋白表达均为阳性,主要位于细胞膜和细胞质;(3)CD44v6高表达(≥9)分与宫颈鳞癌分期、淋巴结转移、预后有关(P<0.05),与分化程度无关(P>0.05);(4)kaplan meier-plotter进行生存分析宫颈鳞癌中ABCG2、SOX2、KLF4与预后负相关,Lrig、BMI1、NANOG、UTF1与预后无关。结论(1)宫颈癌细胞系及组织中CD44v6变异体表达最高,SiHa、HeLa细胞系CD44s变异体表达量较高,ME180细胞系以CD44v型表达为主;(2)CD44v6强表达(≥9分)参与宫颈鳞癌的侵袭与转移,可能作为判断宫颈癌患者预后的重要生物学指标;(3)kaplan meier-plotter进行生存分析宫颈鳞癌中肿瘤干细胞标志物ABCG2、SOX2、KLF4可能作为预后指标。
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