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碱性蛋白酶是一种蛋白水解酶,属于内切型丝氨酸蛋白酶。其突出的特点是有具有较广的pH应用范围,可以从中性到碱性的范围内发挥催化作用。普遍用于食品及洗涤行业。固定化酶相比于游离酶具有稳定性高及易回收等优点,本文使用生物酶法催化水解缬沙坦甲酯,以筛选合适的酶固定化材料为目标,从蛋白酶结合量及酶活力回收来考察固定化材料对碱性蛋白酶催化性能的影响,得出较好的固定化碱性蛋白酶载体,主要工作内容如下:首先从固定化方法和载体入手,以蛋白酶结合量和固定化酶活力回收为指标。初步筛选得到,1000EPN氨基树脂共价结合法固定化碱性蛋白酶回收达到79%,蛋白酶结合量达到49.5 mg/g载体;琼脂糖包埋法固定化碱性蛋白酶酶活力回收达到76%。再对初步筛选得到的1000EPN氨基树脂进行了固定化工艺研究,结果得到使用8%戊二醛活化1h,1000EPN氨基树脂,固定化条件20℃,0.1MpH7.5磷酸缓冲溶液固载50mg蛋白酶,固定化4h,蛋白酶结合率高达99.5%,蛋白酶酶活力回收高达86%。在最佳固定化工艺条件下,1000EPN氨基树脂共价结合的蛋白酶储藏于2-8℃冰箱中,储存180d,酶活力残余24.19%;接下来对筛选得到的琼脂糖,对其固定化工艺进行研究,结果表明,选用0.1 MpH9.5碳酸缓冲溶液,质量分数2.5%琼脂糖包埋100 mg蛋白酶,此时酶活力回收高达80%。在最佳固定化工艺条件下,包埋酶储藏于2-8℃冰箱中,储存70天后,酶活力残余30.37%;最后研究游离酶催化水解缬沙坦甲酯工艺,确定最佳催化水解工艺条件,结果表明在40℃下,20g/L蛋白酶催化水解1g/L缬沙坦甲酯,反应44h后,催化率达到86%。以此游离酶催化工艺为基础,考察这两种固定化酶的催化工艺及其操作稳定性,结果表明,这两种固定化碱性蛋白酶催化性能和游离酶相差无几,以催化水解50%缬沙坦甲酯为目标,1000EPN氨基树脂固定化蛋白酶在重复使用5次之后,酶活力残余60.71%,琼脂糖包埋固定碱性蛋白酶在重复使用5次之后,酶活力残余35.52%。