目的：怒作为一种负性情绪,对人的身心产生不良影响,并且严重阻碍人与人之间的情感交流,破坏友谊、爱情、家庭关系。诸多研究显示怒易引起女性生殖内分泌的改变,继而引发诸多妇科内分泌疾病,如闭经、月经紊乱、不孕症、经前期综合征、无排卵、卵巢早衰等。中药治疗不仅能改善怒的症状,而且对纠正这种怒情绪引起的内分泌失调有着良好的效果。本研究旨在探索养阴舒肝法对肝郁气滞月经失调患者的改善作用,及进一步探究养阴舒肝法治疗“怒”伤致内分泌紊乱的机制,为临床养阴舒肝法的应用及养阴舒肝胶囊的应用提供理论基础及依据。方法：临床研究：采用随机对照的临床试验设计,纳入2011年10月至2012年2月在广东省中医院妇科门诊就诊的月经不调患者56例,按就诊顺序随机分为2组：治疗组和对照组,其中治疗组收集病例26例,对照组26例。两组各服中药8周,治疗前、治疗4周后、8周后分别进行一次SCL90量表、月经情况评定,并在治疗前后检测血清FSH,E2的浓度和卵巢基础窦卵泡数,同时检测血、尿常规、肝肾功能、心电图等一般安全性项目,填写观察表,记录不良反应。实验研究：分6部分进行。第一部分“怒”对雌性大鼠行为学影响的评估及比较,分别观察了正常组、模型组、养阴舒肝胶囊低、中、高剂量组五组的水平运动、垂直运动及旷场实验总分情况。第二部分“怒”对雌性大鼠生殖内分泌的影响,观察比较五组大鼠AMH、INHB、E2的情况；第三部分“怒”对雌性大鼠脑神经递质的影响,观察比较五组大鼠海马区的5-HT、5-HIAA、NE、 DA的含量：第四部分“怒”对雌性大鼠下丘脑-卵巢雌激素受体的影响,观察比较五组大鼠下丘脑、卵巢ERβ积分光密度；第五部分养阴舒肝胶囊对大鼠心、肝、肾形态学的影响,观察服用养阴舒肝胶囊4周后大鼠心肝肾形态学改变；第六部分养阴舒肝胶囊对大鼠血清ALT、CR的影响,观察服用不同剂量养阴舒肝胶囊4周后大鼠血清ALT、CR改变。成果：1.临床疗效比较：根据对月经情况治疗前后的比较进行临床疗效评价,以痊愈、显著进步、进步均为有效计算,得出治疗组的总有效率为84.62%,对照组有效率为84.62%；组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明治疗组和对照组的疗效相当(P>0.05)。据对敌对因子各症状条目治疗前后比较：两组在易烦恼和激动、不能控制地发脾气两方面评分均下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组间差异无统计学意义,说明两组对怒敌对症状的改善作用相当。2.SCL-90敌对因子总分比较：治疗4周与治疗前SCL-90量表敌对因子总分的比较：组内比较,两组治疗4周后SCL-90敌对因子总分均下降,但治疗组差异无统计学意义(P>0.05),对照组差异有统计学意义(P<0.05)；组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明服药治疗4周后,两组敌对因子总分均下降,但下降幅度无明显差升。治疗4周与治疗8周SCL-90量表敌对因子总分的比较：组内比较,两组治疗8周后较治疗4周时SCL-90敌对因子总分均下降,但治疗组差异有显著性(P<0.05),对照组差异无统计学意义(P>0.05)；组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明服药治疗8周后较4周时,两组敌对因子总分均下降,但下降幅度无明显差异。治疗8周与治疗前SCL-90量表敌对因子总分的比较：组内比较,两组差异均有显著性(P<0.05),说明两组治疗8周后较治疗前SCL-90敌对因子总分均显著下降；组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明服药治疗8周后与治疗前比较,两组敌对因子总分均下降,但下降幅度无明显差异。3.治疗前后FSH、E2、窦卵泡数比较：治疗前后血清FSH、E2含量、窦卵泡计数相比,治疗组和对照组组内比较,差异均无显著性(P>0.05)；组间比较,差异无显著性(P>0.05),提示两组治疗前后,血清性激素检测值、窦卵泡数均无明显变化。4.两组治疗前后均未见明显(严重)不良反应,安全性检测均未见异常。5.各组大鼠行为学测试结果：旷场实验：与正常对照组比较,“怒”模型组水平得分、垂直得分、总分均增高,垂直得分和总分差异具有显著性(P<0.01)；与模型组相比较,中药高剂量组与中药中剂量组水平得分下降,差异有统计学意义(P<0.05),总分降低,差异有显著性(P<0.01)；垂直得分降低,与高剂量组间差异有显著性(P<0.01),与中剂量组间差异有统计学意义(P<0.05),中药低剂量组垂直得分降低,差异具有显著性(P<0.01)；水平得分、总分差异无统计学意义(P>0.05)；各给药组相比较,中药低剂量组水平得分较中药中剂量组增高,差异有统计学意义(P<0.05)；中药低剂量组较中药高、中剂量组总分均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比较,模型组中央格时间、粪便粒数增多,修饰次数、修饰时间减少,差异具有显著性(P<0.01)；中药低剂量组中央格时间增高、修饰次数减低,差异有统计学意义(P<0.05),修饰时间、粪便粒数差异无统计学意义(P>0.05)；中药中剂量组中央格时间增多,差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比较,中药高剂量组中央格时间减低,差异有显著性(P<0.01)、粪便粒数减低,修饰次数、修饰时间增多,差异有统计学意义(P<0.05)；中药中剂量组中央格时间减低、差异有显著性(P<0.01),粪便粒数减低,修饰次数增多,差异有统计学意义(P<0.05)；各给药组相比较,中药高、中剂量组较中药低剂量组中央格时间减少,差异有显著性(P<0.01),修饰次数、修饰时间、粪便粒数差异无统计学意义(P>0.05)。6.各组大鼠血清AMH、 INHB、E2含量比较结果：AMH含量五组间比较：模型组与正常组、高、中剂量组间存在差异,差异有显著性(P<0.01)；模型组与低剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)；正常组与高剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)；高剂量与中剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。INHB含量五组间比较：模型组与正常组、高、中、低剂量组间差异具有显著性(P<0.01)；正常组与高剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)；高、中剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。E2含量五组间比较：模型组与正常组、高、低剂量组间差异具有显著性(P<0.01)；模型组与中剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。7.各组大鼠海马区脑神经递质比较：海马NE含量比较：与正常对照组相比较,模型组大鼠海马NE含量明显增高,差异具有显著性(P<0.01)；中药中、低剂量组含量升高,差异具有显著性(P<0.01)；中药高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比较,各给药组NE含量降低,中药高剂量组差异具有显著性(P<0.01)；中药中、低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。各给药组相比较,中药高剂量组NE含量较中、低剂量组低,差异有显著性(P<0.01)；中药中、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。海马DA含量比较：与正常对照组相比较,模型组DA含量增高,差异具有显著性(P<0.01)；中药中、低剂量组含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；中药高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比较,中药高剂量组含量降低,差异具有显著性(P<0.01)；中药中、低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。各给药组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。海马5-HT含量比较：与正常对照组相比较,模型组5-HT含量增高,差异有显著性(P<0.01)；中药低剂量组显著增高,差异有显著性(P<0.01)；中药高、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比较,中药高、中剂量组含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。各给药组相比较,中药高、中剂量组较低剂量组含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。海马区5-HIAA含量五组间比较：模型组与正常组差异有统计学意义(P<0.05)；模型组与高剂量组间差异具有显著性(P<0.01)；高剂量与低剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。8.各组大鼠下丘脑-卵巢ERβ积分光密度比较结果：下丘脑ERβ IOD：与正常对照组相比较,模型组下丘脑ERβ积分光密度下降,差异无统计学意义(P>0.05)；与模型组相比较,各给药组下丘脑ER β积分光密度增加,中药低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)；中药中、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)；各给药组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢ERβ IOD：与正常对照组相比较,模型组、低剂量组卵巢ERβ积分光密度下降,但差异无统计学意义(P>0.05)；与模型组相比较,各给药组卵巢ERβ积分光密度增加,中药高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05)；中药中、低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。各给药组相比较,中药高剂量组ERβ积分光密度较中、低剂量组高,高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)；中药中、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。9.各组大鼠心、肝、肾组织形态结果显示：养阴舒肝胶囊低、中、高浓度剂量均未见异常。10.各组大鼠血清ALT、 CR比较结果：养阴舒肝胶囊中、高浓度组ALT比正常组稍高但差异无统计学意义(P>0.05)。养阴舒肝胶囊高浓度组CR较正常组稍高,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.养阴舒肝汤与逍遥散对肝郁气滞型月经失调患者的月经情况及易烦恼激动、不能控制地发脾气的症状均有明显改善作用,两者疗效相当。2.养阴舒肝汤与逍遥散均能降低SCL90敌对因子总分,在治疗8周后效果最显著,与治疗前存在明显差异。两组间疗效相当。两药对血清FSH、E2、窦卵泡数的改善均不明显。3.在行为学试验中,大鼠经“怒”应激后水平得分和垂直得分均显著增高,大鼠兴奋性、敏感性增强,探究活动增多。而大鼠离开中央格的时间减慢,其活动迟钝,表明激怒应激后大鼠的空间认知能力降低。修饰时间及修饰次数降低,排便粒数增多,反映激怒后大鼠对新环境的适应能力减弱,紧张程度增加。养阴舒肝胶囊可以降低水平得分、垂直得分、旷场试验总分,减少中央格时间、粪便粒数,增多修饰次数,表明养阴舒肝胶囊对怒情绪导致的过度兴奋及紧张情绪有明显缓解作用。4.经“怒”应激后的大鼠E2、INHB、 AMH含量均较正常组降低,提示大鼠经怒不良情绪应激后卵巢功能受损。养阴舒肝胶囊各剂量组AMH、 INHB、E2含量均较“怒”模型组增高,提示养阴舒肝胶囊对卵巢功能有一定的恢复作用。其中高剂量组AMH、INHB含量较正常对照组稍有增高,而E2含量则接近正常组水平,考虑可能与养阴舒肝胶囊短期内能明显促进卵巢窦前和小窦状卵泡发育有关,当然亦不排除实验及检测误差带来的可能,尚需进一步研究证实。5.经“怒”应激后大鼠海马区NE、 DA、5-HT、5-HIAA均升高,可能与怒不良情绪的应激,导致神经内分泌失调有关；经养阴舒肝胶囊干预后发现,高浓度剂量组明显降低海马区4种递质的含量,而中剂量组能明显降低5-HT含量。考虑高剂量浓度的养阴舒肝胶囊对改善“怒”应激引起的神经内分泌的改变作用为更好。6.经“怒”不良应激后大鼠下丘脑、卵巢ER β积分光密度均下降,但差异无统计学意义,表明经“怒”不良应激后大鼠下丘脑、卵巢生殖内分泌功能轻微受损,经养阴舒肝胶囊药物治疗后下丘脑、卵巢ERβ积分光密度不同程度的恢复至正常水平。且低剂量养阴舒肝胶囊使下丘脑ER β积分光密度显著升高,高剂量养阴舒肝胶囊使卵巢ERβ积分光密度显著升高。考虑下丘脑对养阴舒肝胶囊的药物起效作用可能先于卵巢。7.经对服用养阴舒肝胶囊的大鼠进行心肝肾形态学及血清ALT、 CR的检测发现,大鼠服用3种浓度剂量的养阴舒肝胶囊4周后均未出现心肝肾组织器官的功能损伤；提示3种浓度剂量的养阴舒肝胶囊均在对大鼠未造成损害的安全范围内。本文通过临床研究发现养阴舒肝汤对肝郁气滞型月经失调患者的月经改善及烦躁易怒症状的改善作用与逍遥散相当,丰富了临床治疗的内容,增加了患者用药的选择机会。通过动物实验建立情志因素(怒)影响下的育龄期雌性大鼠模型,观察到其行为学、内分泌、神经递质及雌激素受体方面的改变,初步提示在“怒”不良情绪影响下女性易出现行为情绪异样甚至会发生神经、生殖内分泌紊乱。中药养阴舒肝胶囊可缓解“怒”引起的兴奋紧张情绪,并对生殖内分泌、神经递质等方面的异常变化具有改善作用,从而使失调的机体内环境回归稳定；全文结合,为临床运用王教授经验方养阴舒肝胶囊(养阴舒肝汤)治疗女性“怒”情绪相关疾病提供了理论依据。研究提示养阴舒肝胶囊高剂量浓度的效果可能优于中低浓度剂量,并且治疗8周未见心肝肾重要器官的病理改变,所以目前养阴舒肝胶囊合理有效的临床用药剂量可能尚待进一步研究。