原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC,以下简称肝癌)是全世界排名第六位的最常见恶性肿瘤,其发病率正逐年上升。虽然肿瘤切除及肝移植大大提高了早期肝癌患者的生存率,但是高复发风险仍然危害着患者的预后健康,术后5年内仍有50%-70%复发率。因此,深入研究肝癌的转移和复发机制,通过机制的研究来探寻有效的对抗转移和复发的治疗,已经成为现今肝癌防治以及预防术后复发的重点之一。肿瘤的发生发展、侵袭转移是一个多步骤的复杂动态过程。包括染色体水平的改变,癌基因表达的增加,抑癌基因的失活,与肝癌转移复发相关的细胞因子、受体及粘附分子的表达,某些信号通路的改变等。许多研究已经证明某些癌基因的表达增加与肝癌发生发展及不良预后有着明显关系。肿瘤神经腹侧抗原-1(Neuro-oncological ventral antigen-1, Noval)基因是一种中枢神经系统特异性的RNA结合蛋白。其作为一种神经系统的自身抗原,首先在副肿瘤性斜视眼阵挛-肌阵挛共济失调(Paraneoplastic Opsoclonus-Myoclonus Ataxia, POMA)患者中被发现。一些研究已经发现Noval在恶性肿瘤细胞中有表达。但至今未有研究报道关于Noval在肝细胞肝癌中的表达。本研究探讨了Noval在人肝癌组织中的表达情况及同时通过各种体内体外实验了解N oval基因在肝癌发生、发展中的临床意义和潜在作用机制,初步证明Noval基因是肝癌发生相关的新的易感基因。本研究分为三部分：第一部分Noval在人肝癌组织中的表达及与患者临床病理特征的关系我们采用免疫组化法检测了Noval在91例肝癌组织和配对癌旁组织中的表达,同时我们随机选取了四对肝癌和癌旁组织,提取组织蛋白后通过免疫印迹法检测Noval蛋白表达量。免疫组化及免疫印迹法均提示Noval在肝癌组织中的表达水平高于配对癌旁组织。进一步结合临床随访资料后发现肝癌组织Noval阳性表达是影响总生存率(Overall survival rate,OS)、至复发生存率(Time to recurrence rate, TTR)、早期复发的独立危险因素。Kaplan-Meier生存曲线显示,癌内高表达Noval的患者OS和TTR要显著低于低表达组。而癌旁Noval高表达患者OS和TTR与低表达患者相比无明显差异。这一部分研究提示,Noval可能与HCC患者预后相关,在HCC的转移复发中起一定作用。第二部分Noval诱导型表达载体的构建及体外对肝癌细胞生物学行为的影响第二部分中,我们进一步构建和验证了Noval干扰和过表达的诱导型载体的单克隆细胞株。诱导型表达载体是通过强力霉素(Doxycycline, Dox)来诱导基因的过表达和下调。随后通过一系列体外细胞功能实验,进一步证实了与对照组相比,Noval下调后,其肝癌细胞的迁移和侵袭能力能明显减弱；另一组,过表达Noval后细胞增殖和迁移能力相比于对照组明显增强。提示Noval可能是通过调控肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,从而促进了肝癌细胞的增殖及术后的复发。第三部分体内Noval对肝癌细胞生物学行为的影响及其促进肝癌发展的潜在机制探讨第三部分中,我们首先行裸鼠体内皮下成瘤实验。实验组裸鼠给予Dox加入饮用水中浓度为1mg/ml;对照组正常饮食不加Dox。实验结果提示,Noval过表达对肝癌肿瘤具有促进生长的作用,而相反下调Noval能够抑制肝癌肿瘤生长。进一步查阅相关文献,我们选择Noval参与的可变剪接GABAA受体γ2(GABAARγ2)进行深入研究。免疫组化及Western blot检验发现Noval表达下调的同时,GABAARγ2存在表达上调,而相反的Noval过表达后,(GABAARγ2表达下调；GABA的表达量与GABAARγ2的表达量呈现相同的趋势。免疫共沉淀提示Noval与GABAARγ2不仅仅在中枢神经系统存在相互作用,在外周肿瘤组织中同样存在相互作用。我们猜想,肝肿瘤细胞异位表达的Noval,通过下调GABAARγ2的表达,进一步使得GABAARγ2介导的氯离子内流减少,肿瘤细胞膜电位产生去极化,最终发生肿瘤细胞的增殖。