前言 人类免疫缺陷病毒是获得性免疫缺陷综合征的病原体，HIV感染／AIDS目前尚无法治愈，也无有效的疫苗预防。HIV感染流行难以控制的主要原因是其基因具有高度变异性。V3环基因变异与HAY-1的细胞嗜性、复制动力学、细胞致病性有密切关系，并可以使HIV-1逃避细胞毒性T细胞及中和性抗体的免疫攻击。 有研究表明从无症状感染者体内分离到的毒株主要为巨噬细胞嗜性／非合胞体诱导型(M／NSI)毒株，复制较慢；而从AIDS期病人体内则分离到T细胞嗜性／合胞体诱导型(T／SI)毒株，复制较快。由M嗜性向T嗜性、NSI向SI表型的转变可能与CD4~+T细胞快速下降和迅速进展到AIDS期相关。V3环基因变异对上述表型变化可能有重要影响。HIV基因变异受到不同毒株的生物学特征、宿主机体免疫力水平及治疗干预的多重影响，不同毒株在不同人群中流行会具有不同特点，因而通过对V3环及侧翼序列的基因、氨基酸序列分析，明确我国HIV感染人群中HIV-1变异的特征和变化，探讨其与病情进展程度的关系，可以为今后开展基因治疗、设计合理疫苗及观察病情进展提供理论依据。 材料与方法 收集我国辽宁省不同亚型HIV感染者／AIDS患者的EDTA抗凝全血标本。提取整合有前病毒的PBMC基因组DNA，以外膜蛋白特异性引物ED5／ED12、ED31／ED33进行nested-PCR扩增，PCR产物直接测序。对我国HIV－二感染者进行分组，二组：AIDS组人D4细胞＜200 X 10勺L／组：无症状 HIV感染组，CD4细胞3200 x 10‘／L。下载 HIV Sequence Database中各亚型 HIV－1共享序列，用BIOEDIT软件包对下载序列及测得序列进行排列比对、核昔酸及氨基酸离散率计算，生成系统进化树。统计V3环区核昔酸及氨基酸突变位置和种类，与国内外HIV－l流行株序列进行比较。以 SNAP程序计算同义取代和错义取代发生率由和dn及比值由／dn。分析无症状HIV－l感染组和AIDS组由／dn的变化情况。秩和检验统计分析。 实验结果 1．我国不同病期感染者体内HIV－1毒株V3环氨基酸变异特点： 在 AIDS组毒株的 V3环＊ 位出现 R取代 S；13出现 S、TJ取代H；19位出现V取代A；20位出现Y取代F；第25位N取代D；第29位N取代D等与T嗜性和／或a表型相关的常见突变形式，高于无症状＊IV感染组汀＜o．05入而无症状＊IV感染组在与M嗜性和／或Na表型相掳n 位全部为S；第钻位粉为酸性氨基酸D或中性氨基酸Q；值得注意的是两组中发现不同的少见V3环顶端四肽组成形式闪GR、APGQ和RP孤、GLGR、RPGA及第5位H取代N，第34位S＊取代H等罕见取代形式。 2．CD4绝对计数与不同疾病阶段免疫压力的关系 AIDS组 CD4绝对计数值（7。61．4）X 10‘／L，ds／dn为二．35t 0．42；无症状感染组 CD4计数（447。221．7）X 10勺L，ds／d为1．25 t o．妊。AIDS组较无症状感染组dy血有增大趋势，但未达显著性差异汀＞0．05人 3不同 HIV叫亚型对基因变异的影响 ·2· 相对于各自不同亚型的国际共享序列人亚型各毒株基因离 散率最小6．1畅do．90畅；B亚型各毒株平均离散率9．7畅。 2．49％，但毒株间差异最大；A亚型各毒株平均基因离散率11．7％ 20．83％沁亚型各毒株平均基因离散率最大 15．0％SI．06％。 在系统进化树上各亚型毒株分别与各自的国际共享序列集中在一 起人亚型各毒株彼此间分支最短F亚型各毒株之间分支长度差” 别最大。此外，A人亚型AIDS期的毒株序列分别聚在一起，与无 症状感染期毒株分开；只有yi刁 J一毒株例外。 讨 论 HIV－二外膜蛋白V3区氨基酸序列变化能够影响到病毒对 巨噬细胞及转化T细胞系等易感细胞的亲嗜性、病毒的复制能力 及诱导合胞体形成的能力。目前已知由感染无症状期进人AIDS 期过程中HIV毒株出现由M嗜性／NSI表型向T嗜协SI表型的 转化，通过病毒的生物学表型为中介，将病毒基因、氨基酸水平的 变化与临床病期之间建立了一定的相关性。 在我国的 AIDS人群中存在毒株 V3环第＊ 位、13位、19位、 20位在5位在9位出现氨基酸取代较多见，高于无症状感染组u ＜0．05X与国外资料不同的是，我们未发现第＊J2位出现此类 突变；而在无症状感染组毒株中J3环第 11位在5位全部是 M嗜 性／NSI表型毒株的氨基酸特征。此外，两组中出现如第5位N－－＋ R，第 34位 H—S，F等罕见突变及 GQGR、APGQ RPGA、RLGR RPGQ·等少见的V3环顶端四肽组成形式。由于V3环顶端四肽组 成对V3环抗原结构有重大影响，有必要对罕见变异的意义进一 步考证。 HIV在体内的变异情况是自发突变和免疫选择压力共同作用 的结果。在我们测得的数据中无症状感染组ds／dn平均水平1．