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克伦特罗具有典型的β—肾上腺素活性和对β2受体的选择性亲和力，它在兽医临床上被用作支气管扩张剂用于治疗气管炎和哮喘。但若在养殖业非法用作营养再分配剂以提高瘦肉率，可造成其在动物性产品中的残留而危害消费者健康。庆大霉素作用于多种革兰氏阳性和阴性菌，在兽医临床上，庆大霉素主要通过注射途径给药，用于呼吸道感染以及乳腺感染等。但该药的排泄较慢，如果使用不当，容易造成在动物性产品中的残留蓄积。青霉素G既能被青霉素酶灭活，也能被胃肠道的酸性环境降解，兽医临床上多以注射方法用于革兰氏阳性敏感菌引起的感染性疾病（如奶牛乳腺炎等）的治疗，青霉素G是牛奶中比较常见的残留药物之一，可以引起过敏反应，抑制酸奶加工过程中乳酸菌的生长。因此，建立针对这些药物残留的快速检测方法对控制动物性食品的卫生质量、保障消费者健康具有比较重要的社会经济意义。 上述三种药物为小分子半抗原，缺乏免疫原性。将半抗原与合适的载体蛋白偶联后，半抗原可以成为全抗原并具有较好的免疫原性。碳二亚胺（EDC）是一种同型双功能交联剂，可以通过一步反应形成稳定的半抗原—载体复合物。免疫原EDC偶联试剂盒可用于克伦特罗、青霉素和庆大霉素的偶联。按照半抗原—载体EDC标准偶联程序，我们偶联了克伦特罗—BSA、克伦特罗—OVA、青霉素—BSA、青霉素—OVA、庆大霉素—BSA、庆大霉素—KLH。偶联物4℃透析3天后，用BSA偶联物加佐剂免疫新西兰白兔。从第三次免疫后7天心脏采血。 放血分离血清后，以间接ELISA测抗体效价，用OVA和KLH偶联物包被酶标板，1％酪蛋白封闭1小时，一抗（倍比稀释的相应血清）和酶标二抗（500×稀释的羊抗兔IgG/HRP）分别在37℃反应2小时。PBST洗3次后用OPD（邻苯二胺）显色，最后用2M硫酸终止反应，酶标仪测490nm OD值。根据OD值（Y-轴）和稀释度（X—轴）的曲线，找出免疫血清曲线中的拐点及其对应X-轴的数值确定抗体效价。方案一中青霉素抗体效价为1600×，方案二中克伦特罗抗体效价为400×。在方案三中，克伦特罗、青霉素和庆大霉素抗体效价分别为400×，400×和200×。在间接竞争ELISA和硝酸纤维素膜试验中，我们同时比较了1％OVA、1-3％明胶、 l％BSA的封闭效果，结果表明 1％酪蛋白是最优的封闭液。 我们用间接竟争ELISA对尿液中克伦特罗残留进行了模拟检测。方法是：用克 伦特罗－OVA 200 X稀释包被酶标板，l％酪蛋白封闭，然后用 10 X稀释的亲和层析 纯化兴奋剂抗体IgG和含有兴奋剂的样品同时竞争，最后加酶标二抗，OPD底物显 色。同时，用不同浓度的克伦特罗标准品同时进行检测，并制作参比曲线进行回归 分析。初步结果表明：间接竟争ELISA的检测下限可达到10ng／ffil。为进一步优化 并建立克伦特罗的ELISA检测方法奠定了基础。