淫羊藿(Epimedium)作为一种传统中药材,具有补肝肾、强筋骨、助阳益精和祛风湿等多种药理功能。目前,对其主要活性成分淫羊藿苷的提取分离和药理功能已进行了较充分的研究。随着对淫羊藿药材中化学成分研究的不断深入,朝藿定因含量丰富、药效显著而逐渐受到关注,且朝藿定A、B、C与淫羊藿苷一起被认为是淫羊藿药材的标志性化合物,因此,研究朝藿定的提取分离工艺及药理功能对淫羊藿药用资源的有效保护及可持续丌发具有重要意义。朝藿定A、B、C由于结构相近、理化性质相似而不易分离纯化。目前制备高纯度朝藿定单体的方法较少、工艺复杂且成本较高,多限于实验室小规模制备。优化朝藿定单体的分离纯化工艺,实现其简便、高效的大规模生产,是深入研究朝藿定的药理功能,提高淫羊藿药材有效利用度的基础。本研究以分布范围较广、野外资源丰富且质量较为稳定的心叶淫羊藿和柔毛淫羊藿为实验材料,先后采用乙醇浸提、大孔吸附树脂柱层析、有机溶剂萃取和反相硅胶柱层析等方法,通过单因素试验、正交试验设计和响应面法研究朝藿定A、B、C与淫羊藿苷的提取、分离及纯化工艺。实验结果如下：(1)与水浸提法相比,乙醇浸提法对淫羊藿总黄酮的提取转移率较高。分别考察液固比、乙醇浓度、浸提时间、浸提温度和浸提次数对淫羊藿总黄酮提取转移率的影响,经响应面法优化,确定乙醇浸提法提取淫羊藿总黄酮的最佳工艺条件为：第一次提取时液固比25mL/g、乙醇浓度44%、时间56min、温度80。C；第二次提取时液固比20mL/g、乙醇浓度44%、时间40min、温度80℃。在此工艺条件下,柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿的总黄酮提取转移率分别为89.56%和87.91%,总黄酮得率分别为0.09g/g药材和0.08g/g药材,粗提物中总黄酮的纯度分别为28.39%和25.51%。(2)通过静态吸附与解吸试验对8种大孔吸附树脂和3种聚酰胺进行筛选,D-101-Ⅰ型大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮的吸附与解吸性能最佳。通过动态柱层析法考察单因素对淫羊藿总黄酮纯化效果的影响,确定Φ1.0×25cm大孔吸附树脂层析柱纯化淫羊藿总黄酮的最佳工艺条件为：吸附时样品浓度2.5mg/mL、上样流速1mL/min、上样量0.39g；解吸时2.5BV10%乙醇除杂、4BV70%乙醇洗脱、洗脱流速1.5mL/min。柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿粗提物经D-101-Ⅰ型大孔吸附树脂纯化后,总黄酮的纯度分别为53.01%和60.55%,回收率分别为68.68%和48.24%。(3)对有机溶剂萃取过程中的溶剂种类、酯相与水相比例、萃取时间和萃取次数等因素进行考察,发现淫羊藿苷主要存在于乙酸乙酯部位,朝藿定主要存在于乙酸乙酯萃取后的正丁醇部位,其最优萃取工艺为：先用乙酸乙酯按酯相：水相为2：1萃取5次,每次1Omin,继而用正丁醇按酯相：水相为1：2萃取3次,每次2min。在柔毛淫羊藿和心叶淫羊藿的乙酸乙酯部位中,淫羊藿苷的纯度分别为8.09%和21.36%,回收率分别为77.05%和66.75%；在乙酸乙酯萃取后的正丁醇部位中,朝藿定的相应纯度分别为24.38%和40.65%,回收率分别为84.80%和77.06%。(4)将正丁醇萃取所得的朝藿定粗品通过反相硅胶柱层析进一步分离纯化,对于Φ1.2×40cm的层析柱,最优工艺条件为：上样量10mg,50%→60%→100%甲醇梯度洗脱,洗脱流速0.5mL/min。结果表明在相同工艺条件下,不同种类的淫羊藿药材由于成分及含量不同,其提取、分离和纯化效果存在差异。柔毛淫羊藿所得产物中朝藿定A、B、C的纯度分别为23.04%、33.57%和54.92%,回收率分别为20.49%、17.19%和15.52%；心叶淫羊藿所得产物中朝藿定A、B、C的纯度分别为12.89%、64.50%和34.74%,回收率分别为37.68%、64.50%和8.06%,可见,柔毛淫羊藿适宜用于朝藿定C的提取分离,而心叶淫羊藿可作为制备朝藿定B的首选材料。(5)选择淫羊藿苷相对含量较高的心叶淫羊藿为材料,其乙酸乙酯萃取所得的淫羊藿苷粗品经反相硅胶柱层析进一步纯化,所得产物中淫羊藿苷的纯度为77.54%,回收率为14.54%。总之,本研究所提出的工艺路线简便易行,成本较低,可操作性强,实现了较高纯度朝藿定与淫羊藿苷的联合制备,对朝藿定A、B和朝藿定C也实现了一定程度的分离,为朝藿定单体的进一步纯化及功能研究奠定了基础。