水茄和荷叶的化学成分研究及药理活性筛选

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水茄(Solanum torvum)和荷叶(Nelumbo nucifera)分别是“沙溪凉茶”和“荷叶凉茶”的主要配方之一。也是近年来研究非常活跃的两种中药,它们在传统中医药和现代保健品中都有广泛的运用。为了全面认识这两种中药的化学成分以及发掘它们的药理活性,本课题进行如下两部分研究。  第一部分,水茄的成分及活性研究。水茄作为广东传统保健饮品“沙溪凉茶的主要配方之一,常以根茎入药。为了全面了解水茄干燥根和茎中的化学成分,为水茄植物的开发利用提供科学依据,并为水茄的质量标准制定、生理药理学研究提供更多的化学物质基础,本文利用薄层硅胶色谱技术作为检测手段,利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、MCI柱、半制备等柱色谱技术分离纯化化合物,通过核磁共振一维波谱、二维波谱、质谱、红外、旋光等现代波谱分析手段鉴定化合物结构,并对已分离得到的化合物进行药理活性的筛选。  结果从水茄茎中分离33个化合物并通过波谱技术鉴定了结构,分别为松柏醛(1)、芥子醛(2)、阿魏酸(3)、对羟基苯甲酸(4)、异香草酸(5)、吲唑(6)、5-hydroxymethyl furfural(7)、丁香酸(8)、4,4-二甲基-1,7-庚二酸(9)、原儿茶醛(10)、壬二酸(11)、2,4,6-三甲氧基苯酚(12)、3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛(13)、soltorvum A(14)、soltorvum B(15)、soltorvum C(16)、13-hydroxysolavetivone(17)、4-hydroxynon-2(E)-enoic acid(18)、ω-hydroxypropioguaiacone(19)、 soltorvumD(20)、1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(21)、(+)-medioresinol(22)、soltorvum E(23)、香兰素(24)、10β,14-dihydroxy-allo-aromadendrane(25)、1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(26)、N-顺式阿魏酰基酪胺(27)、N-反式阿魏酰基酪胺(28)、7-(3-ethoxy-5-methoxyphenyl) propane-7,8,9-triol(29)、β-谷甾醇(30)、2a羟基齐墩果酸(31)、3,5-二甲氧基苯酚(32)和isopterocarpolone(33)。其中化合物14、15、16、20和23为未见文献报道的新化合物;化合物1、2、6、7、11、18、21、25、26、29和33为首次从茄属植物中分离得到;化合物4、8、9、12、13、17、19、22、27、28和32为首次从水茄植物中分离得到。  从水茄根中分离30个化合物并通过波谱技术鉴定了结构,分别为torvoside D(G1)、N-p-香豆酰酪胺(G2)、10β,13,14-trihydroxyalloaro-madendrane(G3)、pterodontriol A(G4)、10β,12,14-trihydroxyalloaromadendrane(G5)、3β,11-dihydroxy-4,14-oxideenantioeudesmane(G6)、 Spiro[4.5] deca-6,9-dien-8-one,2-[(1Sor R)-1,2-dihydroxy-1-methylethyl]-6,10-dimethyl(G7)、 soltorvum F(G8)、1β,10β,12,14-tetrahydroxy-allo-aromadendrane(G9)、2-(1,2-dihydroxy-1-methylethyl)-6,10-dimethyl-9-hydroxyspiro[4,5]dec-6-en-8-one(G10)、1β,10β,13,14-tetrahydroxy-allo-aromadendrane(G11)、 methyl4-O-feruloyl-5-O-caffeoylquinate(G12)、 Irgafos168(G13)、(+)-lyoniresinol3β-O-β-D-glucopyranoside(G14)、methyl3-O-feruloylquinate(G15)、绿原酸(G16)、阿江榄仁酸(G17)、邻苯二甲酸二丁酯(G18)、neochlorogenin(G19)、eochlorogenin6-O-β-D-xylopyranosyl-(1→3)-β-D-quinovopyranoside(G20)、terminolic acid(G21) Uncargenin C(G22)、neochlorogenin6-O-β-D-quinovopyrano side(G23)、角鲨烯(G24)、十六烷酸(G25)、 Spiro[4.5]deca-6,9-dien-8-one,7-hydroxy-6,10-dimethyl-(1-methylethenyl)(G26)、2,5-bis(2-phenylpropan-2-yl)phenol(G27)、solavetivone(G28)、3β-乙酰基齐墩果酸(G29)和(+)-anhydro-β-rotunol(G30)。其中化合物G6、G8、G9、G11和G27为未见文献报道的新化合物;化合物G3、G4、G5、G12、G13、G14、G15、G21和G22为首次从茄属植物中分离得到;化合物G7、G10、G16、G17和G18为首次从水茄中分离得到。  综上所述,共从水茄中分离得到63个化合物,包括10个新化合物。从获得的化合物类型可以看出,水茄茎中主要为酚类和倍半萜类化合物,水茄根中主要为倍半萜,甾体和三萜类化合物。药理结果显示,水茄中的部分倍半萜类单体具有较好的抑制ConA诱导的脾细胞增殖的作用,其中化合物14、17、20、23、25、G26和G28的抑制作用较强,化合物15、16和30也有抑制作用,但作用较弱。  第二部分,荷叶的成分及活性研究。荷叶是“荷叶凉茶”的主要配方之一,具有清暑利湿、升阳发散、祛瘀止血等作用,并有用于减肥的报道。查阅荷叶文献发现荷叶中含有大量的异喹啉类生物碱,它们的活性主要集中在降脂降糖、抗菌和抗肿瘤等方面,许多生物碱单体的药理活性没有进行研究,所以通过分离获得生物碱单体进而进行活性筛选具有重要意义。同时近年来发现低聚原花青素类成分有较好的降糖降脂等作用,与荷叶在凉茶中功效相符合。本论文对荷叶的研究集中在荷叶中生物碱单体的分离纯化、原花青素类成分的鉴定及相关活性筛选方面。利用薄层硅胶色谱技术跟踪化学成分并利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、大孔树脂柱、半制备等柱色谱技术分离纯化化合物,通过核磁共振一维波谱、二维波谱、质谱等现代波谱分析手段从荷叶中分离11个化合物并通过波谱技术鉴定了结构,分别为正二十烷(N1)、β-谷甾醇(N2)、荷叶碱(N3)、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡(N4)、鹅掌楸碱(N5)、观音莲明碱(N6)、原荷叶碱(N7)、杏黄罂粟碱(N8)、去氢荷叶碱(N9)、N-去甲基荷叶碱(N10)和北美鹅掌楸尼定碱(N11)。针对分离得到的9种生物碱,我们进行α-糖苷酶的抑制活性的测试。药理结果显示3种生物碱表现出一定活性,在300μmol/L的浓度下,鹅掌楸碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡和Lysicamineα-糖苷酶的抑制活性分别为40.29%±3.06%,27.62%±2.21%和25.94%±1.09%。实验提示,荷叶生物碱的降糖作用可能是一个多物质的协同作用过程,也与传统中药降糖活性通常比较温和相一致。  虽然中药中的低聚原花青素类成分研究近年来有一些报道,但对荷叶中的原花青素类化学成分研究甚少,化学结构不明确,相关的药理活性研究更少。我们通过HPLC-DAD/ESI-MS方法对荷叶中的原花青素类成分进行定性鉴别,结果初步鉴定了荷叶中的22种原花青素。同时我们有相同方法将荷叶与同植物的莲藕部分进行比对研究,结果从莲藕中的17种原花青素。比对研究发现荷叶中的原花青素和莲藕中的原花青素在组成上具有明显的差异,荷叶中主要是B-typeprocyanidin(PC)三聚体,莲藕中主要是B-type prodelphinidin(PD)二聚体,对不同部位原花青素结构差异的原因我们进行了分析。  药效研究中发现荷叶荷叶原花青素粗提物在浓度100μg/ml下对PA诱导的H9C2心肌细胞具有一定的保护作用,而莲藕原花青素粗提物在同浓度下则无明显保护作用。此外,荷叶原花青素能减少PA诱导的INS-1胰岛β细胞损伤的活性,莲藕原花青素作用不明显。生物活性上的差异与荷叶和莲藕中原花青素结构的不同具有密切联系,这也为合理利用植物莲的不同部位提供科学的依据。  此外针对得到的荷叶生物碱单体我们还进行了抗菌实验。实验测得鹅掌楸碱对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为32μg/mL,Lysicamine的抗菌谱与鹅掌楸碱相同,但作用强度略低,其对大肠杆菌的MIC为64μg/mL,对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为128μg/mL。杏黄罂粟碱对红色毛癣菌和石膏状小孢子菌的MIC为16μg/mL。抗菌结果显示杏黄罂粟碱具有较强的抗真菌作用,鹅掌楸碱和Lysicamine对多种致病菌也均表现出较明显抗菌效果,他们可能是荷叶抗菌活性的来源。
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